شناسایی حالت زنده اما غیرقابل کشت باکتری اشریشیا کلی )Escherichia coli O157:H7( با استفاده از وارونویسی واکنش زنجیره ای پلیمراز) RT-PCR(

Publish Year: 1397
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 428

This Paper With 9 Page And PDF Format Ready To Download

  • Certificate
  • من نویسنده این مقاله هستم

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این Paper:

شناسه ملی سند علمی:

JR_IJMM-12-6_003

تاریخ نمایه سازی: 3 اسفند 1398

Abstract:

زمینه و هدف: باکتریهای متعددی همانند اشریشیا کلی تحت شرایط نامساعد میتوانند وارد حالت زنده اما غیرقابل کشت ( VBNC ( شوند که با روشهای تشخیص بر پایه کشت باکتری قادر به شناسایی نیستند. در تحقیق حاضر، وارونویسی واکنش زنجیرهای پلیمراز ) RT-PCR ( برای تشخیص باکتری Escherichia coli O157:H7 در حالت VBNC بررسی شد. مواد و روش کار: باکتری E. coli O157:H7 به تیمارهای آب مقطر و آب نمک 30 درصد تلقیح و در دمای اتاق نگهداری شد. کشت پذیری باکتریها روی محیط کشت مک کانکی آگار تعیین شد. RT-PCR ژن 16S rRNA شامل استخراج و تخلیص RNA ، تیمار DNase I برای حذف آلودگی DNA و سپس سنتز cDNA و الکتروفورز محصول PCR نمونه های cDNA برای تشخیص زنده مانی باکتری E. coli O157:H7 تحت تیمارهای مورد مطالعه به کار رفت و با نتایج RT-PCR ژن 16S rRNA در باکتری های کشته شده بهوسیله حرارت مقایسه شد. یافته ها: کشت پذیری باکتریها در تیمار آبمقطر طی مدت مطالعه حفظ شد؛ اما تیمار آبنمک 30 درصد باعث کشت ناپذیری باکتری در روز چهارم مطالعه شد. نتایج RT-PCR ژن 16S rRNA بیانگر حفظ بیان این ژن در باکتریهای کشت پذیر و غیرقابل کشت طی مدت مطالعه بود، در حالی که در باکتریهای کشته شده بهوسیله حرارت بیان این ژن منفی بود که نشان دهنده کارایی RT-PCR ژن 16S rRNA در تشخیص باکتریهای زنده از غیرزنده بود.نتیجه گیری: باکتری E. coli O157:H7 تحت استرس شوری 30 درصد وارد حالت VBNC شد که میتواند باعث مخاطراتی جدی برای سلامت انسان شود. وارونویسی واکنش زنجیره ای پلیمراز ) RT-PCR ( میتواند برای تشخیص باکتریهای VBNC به کار رود.

Keywords:

اشریشیا کلی , زنده مانی باکتری , وارونویسی واکنش زنجیره ای پلیمراز

Authors

محمد خضری

گروه فرآوری محصولات شیلاتی، دانشکده علوم دریایی، دانشگاه تربیت مدرس، نور، ایران

مسعود رضایی

گروه فرآوری محصولات شیلاتی، دانشکده علوم دریایی، دانشگاه تربیت مدرس، نور، ایران

اشرف محبتی مبارز

گروه باکتریشناسی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

مهدی ذوالفقاری

گروه فرآوری محصولات شیلاتی، دانشکده شیلات و محیط زیست، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی، گرگان، ایران