کلونینگ و بیان ژن کد کننده پروتیین نوکلیوکپسید ویروس سپتیسمی هموراژی ماهی قزل آلای رنگین کمان (Onchorhynchus mykiss) در باکتری اشرشیاکلی

بیماری ویروسی سپتی سمی هموراژی (VHS) یکی از مهم ترین بیماری های ماهی قزل آلای رنگین کمان است که اخیرا در ایران شیوع گسترده ای یافته و خسارت های بسیار سنگینی را بر پرورش دهندگان تحمیل کرده است. به منظور شناسایی و اطمینان از وجود عامل بروز این تلفات، نمونه برداری از مزارع پرورشی استان چهارمحال و بختیاری- که کانون اصلی همه گیری و تلفات بالا بود- صورت گرفت. ماهیانی که علایم بالینی داشتند، انتخاب شدند و اندام های کلیه قدامی، طحال، قلب و مغز آنها جدا و در الکل 70 درصد ذخیره گردید. بر اساس آزمایش RT - PCR بیماری VHS تایید شد، سپس برای استفاده در بررسی سرولوژیک VHS، یک قطعه از ژن نوکلیوکپسید (N) ویروس VHS، با پرایمرهای پیشنهادی OIE و اندکی تغییر، تکثیر شد و قطعه موردنظر در وکتور PMAL- C2X کلون و سپس در باکتری اشیر شیاکلی Rosetta بیان گردید. پروتیین بیانی با کمک ستون کروماتوگرافی رزین آمیلوز خالص گردید. پروتیین هدف با وزن 61KDa از طریق SDS -PAGE و متعاقب آن ایمونوبلاتینگ ارزیابی شد. مشاهده بیان پروتیین با وزن ملکولی قابل انتظار در SDS - PAGE و واکنش مثبت این پروتیین با سرم موش ایمن شده با پروتیین MBP در ایمونوبلات نشان دهنده بیان موفق این قطعه از پروتیین در باکتری اشرشیاکلی بود

Keywords:

پروتیین نوترکیب نوکلیوکپسید , ویروس سپتیسمی هموراژی , قزل آلا