طراحی واکنش زنجیره ای پلی مراز(PCR) جهت تشخیص مولکولی باکتری هموفیلوس آنفلوانزا

مقدمه: هموفیلوس آنفلوانزا مهم ترین عامل بیماری مننژیت در نوزادان و کودکان زیر ۵ سال است. از این رو تشخیص سریع این عامل ضروری است. مطالعات نشان داده است که روش های مولکولی، تست های اختصاصی برای تشخیص سریع این عامل هستند. هدف این مطالعه، طراحی روش PCR جهت تشخیص سریع باکتری هموفیلوس آنفلوانزا بود. مواد و روش ها: در این مطالعه پرایمر های اختصاصی بر اساس ژن ompp۶ طراحی و واکنش PCR راه اندازی شد. جهت ساخت کنترل مثبت استاندارد، محصول PCR در وکتور pTZ۵۷R/T کلون گردید. حضور ژن مورد نظر در T- وکتور به وسیله پروسه های هضم آنزیمی و توالی یابی تایید شد. حساسیت واکنش PCR، از طریق تهیه رقت های متوالی ۱ به ۱۰ از پلاسمید کنترل مثبت با غلظت اولیه ۱۱ نانوگرم، تعیین شد. ویژگی واکنش با PCR بر روی DNAژنومیک طیفی از باکتری ها ارزیابی شد. یافته های پژوهش: نتایجPCR ، باند مورد انتظار با اندازه ۲۸۰ جفت بازی را نشان داد. نتایج حساسیت، مشخص کرد که کمترین حد تشخیصی واکنش ۳۱۷ کپی است. هیچ گونه تکثیری پس از PCRبر روی DNA ژنومیک باکتری های کنترل منفی مشاهده نگردید. این نتیجه ویژگی واکنش PCR را تایید نمود. بحث و نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که PCR ژن ompp۶ باکتری هموفیلوس آنفلوانزا روشی با حساسیت و ویژگی بالا است و می تواند به عنوان ابزاری در تشخیص سریع مننژیت ناشی از این باکتری به ویژه در موارد مصرف آنتی بیوتیک توسط بیمار در آزمایشگاه های تشخیصی باشد.

Keywords:

haemophilus influenzae , rapid detection , PCR , هموفیلوس آنفلوانزا , تشخیص سریع , PCR