توسعه یک روش PCR جهت تشخیص آلودگی های مایکوپلاسما در رده های سلولی و فراورده های بیولوژیکی

سابقه و هدف : آلودگی لاین های سلولی و فراورده های بیولوژیکی یکی از مشکلات عمده تکنیک کشت سلولی می باشد. تشخیص سریع و دقیق آلودگی مایکوپلاسما قسمت مهمی از کنترل آزمایشگاه های کشت سلول است، وباید روشی در هر آزمایشگاه کشت سلول وجود داشته باشد. سلول های آلوده منتهی به نتایج غیر قابل اطمینان می شود، بنابراین نیاز به یک روش مطمئن در آزمایشگاه امری ضروری می باشد. واکنش زنجیره ای پلیمراز یک تکنیک سریع، حساس و با ویژگی بالا در تشخیص باکتریها به شمار می رود. هدف از این مطالعه بررسی کارآیی PCR در شناسایی آلودگیهای کشت سلول و سایر فرآورده های بیولوژیک است. مواد و روش ها: در این مطالعه ابتدا تکنیک PCR با استفاده از پرایمرهای MGSO و GPO-۱و هدف ژنی ۱۶SrRNA بهینه گردید. همچنین روشPCR مورد استفاده از لحاظ حساسیت و ویژگی بررسی گردید. سرانجام DNAبه روشی ساده از ۷۲ لاین سلولی استخراج و با PCR آزمایش شد. یافته ها: محصول ۷۱۵ جفت بازی توسط پرایمرها تکثیر و از طریق تعیین توالی تائید گردید. در بررسیهای ویژگی، با هیچکدام از DNA های تست شده محصولی تکثیر نشد. این روش دارای حساسیتی در حد ۱۰ کپی از ژنوم هدف بوده و با DNA میکروارگانیسم های دیگر، آمپلیکون ناخواسته ای مشاهده نشد.  نتیجه گیری: نتایج حاصله از این مطالعه مشخص می کند که این روش مولکولی در تشخیص آلودگی مایکوپلاسما در کشت های سلولی و فراورده های بیولوژیک از حساسیت و ویژگی بالایی برخوردار می باشد.

Keywords:

Mycoplasma , PCR , contamination , molecular detection , cell culture , مایکوپلاسما , پی سی آر , آلودگی , تشخیص مولکولی , کشت سلول