طراحی و تولید سازه نوترکیب پروتئین TAT و بخش عملکردی سم دیفتریا و ارزیابی عملکرد آن بر روی لاین سلولی

زمینه و هدف: سرطان، یکی از مهلک ترین بیماری هایی است که در عصر حاضر وجود دارد و درمان های مرسوم به آن نیز دارای موفقیت کمی بوده است. توکسین درمانی سرطان، از روش های درمانی نوینی است که موردتوجه متخصصان ساخت دارو قرار گرفته است. توکسین باکتری دیفتری شامل: سه بخش عملکردی، انتقال دهنده و اتصال دهنده بوده که بخش عملکردی آن باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلول می شود. این مطالعه با هدف تولید بخش عملکردی توکسین دیفتری به همراه پپتید نفوذکننده TAT و بررسی میزان کشندگی آن بر روی لاین سلولی صورت گرفت. روش بررسی: در این مطالعه، طراحی پرایمر برای قطعه ژنی tat-diph انجام شد و سازه ژنی حاوی توالی زنجیره عملکردی توکسین دیفتری و توالی پپتید TAT، تکثیر و در ناقل بیانی پروکاریوت،a ۲۸pET حاوی دنباله هیستیدین کلون گردید. بعد از انتقال به میزبان باکتریایی         (E.coli DE ۲۱ BL ۳)، القای بیان با IPTG صورت گرفت. سپس پروتئین حاصل تخلیص شد و پروتئین نوترکیب با کمک آنتی بادی ضد هیستیدین متصل به HRP با استفاده از تکنیک وسترن بلات تایید گردید. در مرحله بعد، میزان کشندگی پروتئین کایمریک تولیدشده بر روی رده سلولی ۷MCF با روش MTT مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: نتایج حاصل از MTT نشان داد پروتئین نوترکیب TAT-Diph می تواند رده سلولی سرطانی ۷MCF را از بین ببرد. نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد پروتئین نوترکیب با بخش عملکردی توکسین دیفتری و پپتید TAT، می تواند بر روی رده سلولی ۷MCF اثر کشندگی داشته باشد.

Keywords:

Diphtheria toxin , Recombinant protein , TAT , سم دیفتری , پروتئین نوترکیب , TAT