ایمنی زایی آنتی ژنN-CfTX-۲ عروس دریایی در موش سوری

زمینه و هدف: عروس دریایی(Chironex fleckeri) ، سمی ترین گونه و خطرناک ترین موجود دریایی است. CfTX-۲ یکی از پروتئین های آنتی ژنیک زهر عروس دریایی بوده که به منظور تحریک سیستم ایمنی، جهت درمان و به عنوان کاندید واکسن پیشنهاد شده است. این مطالعه با هدف طراحی، بهینه سازی، سنتز و بیان ژن N-CfTX-۲ در  E. coli و بررسی تولید آنتی بادی و ایمنی زایی در موش سوری انجام شد. روش بررسی: در این مطالعه تجربی، توالی ژن کامل N-CfTX-۲ از NCBI (به شماره AFQ۰۰۶۷۷.۱) به دست آمد. پس از بهینه سازی کدونی میزبانE. coli ، سایر بررسی های بیوانفورماتیکی لازم برای بیان بهتر ژن؛ از قبیل پایداری پروتئین و ساختار mRNA انجام شد. توالی ژن جهت سنتز و همانندسازی در وکتور pET۲۱a(+) سفارش داده شد. وکتور نوترکیب به درون باکتری E. coli BL۲۱ منتقل و بیان پروتئین با IPTG القا گردید. پس از تخلیص پروتئین، آنتی ژن حاصل در چهار نوبت به موش ها تزریق و میزان آنتی بادی تولیدی در سرم آنها اندازه گیری شد، سپس آنتی بادی تولیدی از سرم موش جداسازی و به وسیله تست ELISA تایید گردید. ۶۰ روز پس از اولین تزریق، حیوانات به وسیله زهر Chironex fleckeri  چالش شدند. یافته ها: توالی ژنی N-CfTX-۲ کلون شده در وکتور بیانی pET۲۱a(+) به وسیله PCR و پروتئین نوترکیب تولیدشده به وسیله SDS-PAGE و لکه گذاری وسترن تایید گردید. همچنین موش های ایمن شده ۵۰ برابر LD۵۰، زهر عروس دریایی را تحمل کردند. نتیجه گیری: با توجه به خاصیت آنتی ژنی N-CfTX-۲ و تولید آنتی بادی در حیوان آزمایشگاهی، می توان از این پروتئین در مطالعات آتی به عنوان یک کاندید واکسن استفاده کرد.

Keywords:

Chironex fleckeri , Immune system , Toxin ۲ , عروس دریایی , سیستم ایمنی , توکسین ۲