بهینه سازی بیان سم شقایق دریایی (فراگاسیاتوکسین C) در باکتری E.coli سویه BL۲۱
Publish Year: 1394
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 132
This Paper With 12 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_JMUMS-25-132_006
تاریخ نمایه سازی: 2 آبان 1402
Abstract:
سابقه و هدف: شقایق دریایی از جنس اکتینیا در مناطق جزری سواحل صخره ای شمال اسپانیا بسیار متداول است. اکتینیا فراگاسیا یکی از گونه های مهم است که پروتئین سمی فراگاسیاتوکسین C را جهت دفاع و شکار ترشح می کند. هدف اصلی از این مطالعه، انتقال پلاسمید حاوی ژن کدکننده فراگاسیاتوکسین C به اشیرشیاکلی سویه BL۲۱، بیان و یافتن شرایط مطلوب بیان می باشد.
مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی برای انتقال شیمیایی، باکتری ها جهت جذب پلاسمید حاوی ژن FraC به وسیله کلسیم کلراید سرد شسته و جهت اطمینان از انتقال پلاسمیدها، باکتری ها روی محیط حاوی آنتی بیوتیک مناسب (آمپی سیلین) کشت داده شدند. برای اطمینان بیش تر، استخراج پلاسمیدها در حجم کم با استفاده از کیت استخراج پلاسمید GF-۱ صورت گرفت. سپس تحت برش آنزیم های NcoI وHind ІІІ و هم چنین کنترل PCR قرار گرفتند. بعد از تایید حضور پلاسمید حاوی ژن FraC در باکتری میزبان، باکتری ها جهت یافتن شرایط مطلوب بیان پروتئین FraC توسط IPTG ۱mM در زمان های مختلف و دمای cº۲۰ القا شدند. پس از جمع آوری باکتری های بیان کننده FraC در زمان های مختلف، بیان آن ها روی ژل سدیم دودسیل سولفات پلی آکریل آمید(SDS-PAGE) مشهود بود.
یافته ها: نتایج ما نشان داد که پلاسمید حاوی ژن FraC با موفقیت انتقال یافت. هم چنین نتایج SDS-PAGE نشان داد که FraC در زمان های ۶ و ۸ ساعت با استفاده از IPTG ۱mM در دمای cº۲۰ بیش ترین بیان را دارند.
استنتاج: با توجه به نتایج، هر دو مرحله انتقال شیمیایی تاثیر قابل توجهی در کارایی انتقال دارند. رعایت اصول و دمای مطلوب می تواند ما را دریافتن شرایط مطلوب برای بیان هر پروتئین خاص در باکتری ها یاری کند.
Keywords:
Sea Anemones , Fragaceatoxin C , transformation , expression , E.coli , شقایق دریایی , فراگاسیا توکسین C , انتقال , بیان , اشیرشیاکلی
Authors
بابک عبدی
MSc Student in Biochemistry, Department of Biology, Faculty of Science, Urmia University, Urmia, Iran
رشید جامعی
Associate Professor, Department of Biology, Faculty of Science, Urmia University, Urmia, Iran
مهدی ایمانی
Assistant Professor, Department of Basic Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University, Urmia, Iran
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :