طراحی کیت الیزا جهت تعیین IgG علیه توکسوپلاسما در سرم انسان با استفاده از آنتی ژن های دفعی - ترشحی و بررسی قدرت تشخیص آن

سابقه و هدف: روش رایج جهت تشخیص توکسوپلاسموزیس (Toxoplasmosis) تعیین آنتی بادی علیه توکسوپلاسما در سرم به کمک آزمون های سرولوژی می باشد. در مطالعات قبلی از آنتی ژن های دفعی - ترشحی به دست آمده از کشت انگل در محیط کشت RPMI استفاده شده است. در این مطالعه، انگل در مایع صفاق موش کوچک آزمایشگاهی کشت داده شد و از آنتی ژن های به دست آمده به عنوان آنتی ژن در طراحی کیت الیزای تشخیص آنتی بادی های ضد توکسوپلاسما استفاده شد.مواد و روش ها: مایع صفاق موش سفید کوچک آزمایشگاهی که ۳ روز قبل به طریق تزریق داخل صفاقی با تاکی زوئیت های توکسوپلاسما آلوده شده بود، کشیده شد و به میزان ۷۵۰ ×gبه مدت ۱۵ دقیقه سانتریفیوژ گردید. سپس رسوب سولفات آمونیوم اشباع (۴۰ درصد) از مایع رویی آن تهیه و به عنوان ترکیب حاوی E/SAدر شرایط مناسب نگه داری شد. نمونه های سرم انسانی با استفاده از اسباب (kit) الیزا (رادیم IgG ساخت کشور ایتالیا) آزمایش و نمونه های منفی و حاوی IgG تعیین و با آزمون رنگ سنجی نیز تایید شدند سپس مجددا به روش الیزا با استفاده از ترکیب حاوی E/SA تهیه شده در این مطالعه آزمایش شدند.یافته ها: با توجه به نتایج آزمایش، ۳۲ نمونه حاوی IgG علیه توکسوپلاسما و ۴۰ نمونه بدون آنتی بادی علیه توکسوپلاسما انتخاب شد. تحت شرایط مورد نظر در این مطالعه با ۹۵ درصد اطمینان، نقطه برش آزمون الیزا برابر ۰.۷۸ تعیین گردید که جذب نوری سه عدد از نمونه های منفی بیش تر و جذب نوری ۵ عدد از نمونه های حاوی IgG کم تر از نقطه برش به دست آمد. بنابراین حساسیت و ویژگی آزمون الیزا به ترتیب ۸۴ و ۹۲ درصد محاسبه گردید.استنتاج: مطالعه حاضر نشان داد که مایع صفاق موش آلوده به توکسوپلاسما می تواند ترکیب مناسبی جهت به دست آوردن آنتی ژن های دفعی - ترشحی برای استفاده در روش های تشخیص سرولوژی توکسوپلاسموزیس باشد.

Keywords:

Toxoplasmosis , Excreted / Secreted Antigens , ELISA , Toxoplasma , توکسوپلاسموزیس , الیزا , آنتی ژن های دفعی , ترشحی , توکسوپلاسما گوندی