Application of Rapid and Sensitive Real Time PCR Technique in Detection of DNA Impurities in Recombinant Interferon

زمینه و هدف: اینترفرون ها خانواده ای از سایتوکاین ها هستند که در پاسخ ایمنی به عفونت های ویروسی نقش اساسی دارند. در جریان تولید اینترفرون نوترکیب در میزبان بیولوژیک، قطعاتی از اسیدنوکلئیک میزبان وارد محصول می شود. به علت وجود محدودیت های روش های قبلی در تشخیص این آلودگی ها، هدف از این مطالعه، استفاده از روش مولکولی سریع و حساس Real time PCR در این ناخالصی ها می باشد.   مواد و روش ها: ابتدا با استخراج DNA از میزبان باکتریایی و تهیه رقت های متوالی از آن، واکنش Real time PCR به کمک رنگ SYBR Green I انجام گرفت و منحنی استاندارد رسم گردید. پس از استخراج DNA از اینترفرون و انجام واکنش PCR، میزان DNA به کمک منحنی استاندارد، تعیین گردید.   نتایج: بررسی های انجام شده بر روی چند نمونه اینترفرون، میزان آلودگی DNA را حدود ۰۲/۰ پیکوگرم در هر دوز محصول نشان داد. همچنین پرایمرهای طراحی شده در واکنش فوق، هیچ گونه واکنشی با یکدیگر و سایر عوامل مداخله کننده نشان ندادند.  نتیجه گیری: مطالعه فوق برای اولین بار در ایران بهینه سازی شد و نشان داد که تکنیک Real time PCR می تواند به عنوان یک روش کاربردی و بسیار دقیق در مراکز تولیدی جهت تشخیص ناخالصی های DNA ناشی از میزبان، در اینترفرون و سایر محصولات دارویی نوترکیب به کار برده شود.

Keywords:

DNA impurities , Recombinant pharmaceutical products , Interferon , Real time PCR , SYBR Green I , ناخالصی DNA , محصولات دارویی نوترکیب , اینترفرون , Real time PCR , SYBR Green I