کلونینگ و تعیین توالی ژن متالوپروتئاز مقاوم به گرما از باکتری Anoxybacillus flavithermus به دست آمده از چشمه آب گرم قینرجه، مشگین شهر

در موجودات گرمادوست، غالبا بیوماکرومولکول ها مقاوم به حرارت هستند. این بیوماکرومولکول ها علاوه بر دمای بالا، در شرایط به شدت قلیایی یا اسیدی نیز در برابر دناتوره شدن مقاومت می کنند. پروتئازهای پایدار حرارتی پتانسیل قابل توجهی برای بسیاری از صنایع غذایی، تولید کاغذ و شوینده ها، حذف ضایعات سمی و حفاری نفت دارند. این آنزیم ها را می توان از طریق بهینه سازی تخمیر گرمادوست در میکروارگانیسم ها و یا کلون کردن به روش تکنولوژی DNA نوترکیب در یک میزبان مزوفیل به حداکثر تولید رساند. متالوپروتئازها نیز نوعی پروتئاز وابسته به یون هستند. متالوپروتئازی که در مطالعه حاضر مورد بررسی قرار گرفت یک اندوپپتیداز وابسته به یون روی است. ژن متالوپروتئاز از باکتری Anoxybacillus flavithermus کلون شد. از روش PCR برای تکثیر ژن استفاده شد. یک جفت پرایمر با جایگاه برش برای آنزیم های NheI و XhoI طراحی شد، در وکتور pET۲۱a(+) کلون شد و به میزبان BL۲۱ ترانسفورم شد. نتایج حاصل از آنالیز توالی ژن کلون شده حاکی از تشابه ژن مورد نظر با پروتئاز واریانت های مختلف گونه Anoxybacillus flavithermus دارد.

Keywords:

Metalloprotease , Cloning , Anoxybacillus flavithermus , PCR