تولید و بیان پروتئین نوترکیب اسپرم Izumo

غشای پلاسمایی سراسپرم محل اصلی برهمکنش با اووسیت است و پروتئینهای عملکردی مهمی در این فرآیند نقش دارند. مطالعه بیولوژی مولکولی اسپرم تا حد زیادی به منظور پایه گذاری مدلهایی برای ناباروری جنس نر صورت می گیرد. آنتی بادیهای ضد اسپرمی (ASA) به عنوان عامل اصلی ناباروری ایمنولوژیکی شناخته می شوند و برای غیرفعالسازی اسپرمها می توان از آنها استفاده کرد، زیرا باعث نقص در برهمکنش اسپرم- اووسیت می شوند. از آنجا که آنتی بادیها در اسپرم زنده قادر به نفوذ در غشای سلولی خارجی نیستند، بنابراین آنالیز آنیژنی باید محدود به آنیژنهای غشای خارجی اسپرم باشد. از این رو در این پژوهش پروتئین غشایی اسپرم به نام Izumo انتخاب شد و قطعه ای هیدروفیل از آن برای همسانه سازی و بیان پروتئین مورد استفاده قرار گرفت. پس از استخراج RNA از بافت اپیدیدم، cDNA ساخته شد و قسمتی از تراتسکریپت ژن ایزومو با استفاده از آغازگرهای خارجی و داخلی به شیوه nested-PCR ترانسفورم شد. سپس از قطعه با آنزیمهای BamHI و NcoI برش یافت و در ناقل بیانی pQE60 کلون شدند. کلونیهای مثبت حاوی ژن مورد نظر با IPTG القا شدند و پروتئین تولیدی پس از جداسازی از غشاهای باکتریایی توسط ستون کروماتوگرافی نیکل- سفارز خالص سازی شد. چنین انتظار می رود این پروتئین خالص شده تولید آنتی بادی های ضد اسپرمی را در بدن خرگوش القا کند.