بیان آنزیم فعال بتا-گلوکورونیداز در بذر گیاه توتون

هدف: طراحی و تهیه سازه ژنی مناسب و انتقال آن به گیاه توتون و بررسی گیاهان تراریخت حاصله بوده است.مواد و روش ها: سازه اختصاصی بذر حاوی پیشبرنده Napin، توالی Ω ، ژن GUS و توالی SAR در پلاسمید pBI121 طراحی و تهیه و در باکتری E. coli تکثیر شد. ریزنمونه های برگی توتون با آگروباکتریوم سویه LBA4404 به‫روش استاندارد تلقیح شدند. گزینش جوانه های باززایی شده در محیط انتخابی (شامل MS، mg/l  1/0 NAA،  mg/l3 BAP ،mg/L 25 کانامایسین، mg/L 200 سفوتاکسیم) انجام شد. آنالیز گیاهان تراریخت با PCR، RT-PCR و آزمون هیستوشیمیایی انجام شد.نتایج: بررسی مولکولی گیاهان باززایی شده با PCR و آغازگرهای اختصاصی ژن های nptII و GUS نشان دهنده انتقال این ژن ها به گیاه‫چه های باززایی شده بود. نتایج RT-PCR نشان داد که نسخه برداری از ژن nptII در هر دو بافت برگ و بذر صورت می گیرد در حالیکه نسخه برداری از ژن GUS تنها در بذر صورت می گیرد. با توجه به اینکه پیشبرنده NOS (کنترل کننده ژن nptII) عمومی و Napin (کنترل کننده ژن GUS) یک پیشبرنده اختصاصی بذر می باشد، این نتیجه مورد انتظار بود. در نهایت با استفاده از SDS-PAGE و آزمون هیستوشیمیایی، تولید و فعالیت آنزیم بتا-گلوکورونیداز در بذر گیاهان تراریخت تائید شد.نتیجه گیری: نتایج مناسب بودن سازه ژنی طراحی شده را نشان داد، چرا که پیشبرنده Napin به خوبی موجب بیان اختصاصی ژن GUS در بذر شده و توالی امگا نیز در افزایش بیان تراژن موثر بوده است. در ادامه کار می توان این سازه را با جایگزینی ژن های ارزشمند با ژن  GUSبرای تولید پروتئینهای نوترکیب استفاده نمود.

Keywords:

توالی Ω (امگا) , SAR , پیشبرنده Napin , ژن GUS , توتون