طراحی، ترانسفورماسیون و تکثیر ایزوفرم نوترکیب VEGF111b در E.coli Top 10 برای تولید داروی نوترکیب

سابقه و هدف: سنتز پروتیین های نوترکیب با خاصیت مهار گیرنده های رشد در تومورهای سرطانی یکی از راه های جدید درمان سرطاناست. هدف مطالعه حاضر طراحی و کلون ایزوفرم نوترکیب VEGF111b در وکتور pBudCE4.1 و بررسی سازگاری این سازه با باکتری E. coli Top10 جهت تولید داروی نوترکیب است. مواد و روش ها: ایزوفرم جدید VEGF111b با استفاده از توالی های موجود در بانک های ژنی و نرم افزار oligo 7 طراحی شده و توسط آنزیم های BGLII و KpnI بریده شده و در پایین دست پروموتور EF-1 در وکتور pBudCE4.1 کلون شد. وکتور نوترکیب pBud.VEGF111b توسط روش کلرید کلسیم در باکتری E. coli Top10 ترانسفورم شد. جداسازی باکتری های نوترکیب در محیط LBA حاوی غلظت 0/3 و 0/5 درصد آنتی بیوتیک زیوسین انجام شد. در مرحله آخر وکتور نوترکیب با استفاده از کیت استخراج DNA از ژل (Thermo K0513) استخراج شده و وجود قطعه نوترکیب VEGF111b توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. نتایج: الحاق قطعه 111b در جایگاه مورد نظر تایید شد. تمامی کلونی های E. coli Top10 مشاهده شده در محیط حاوی غلظت 0/5 درصد زیوسین حاوی قطعه نوترکیب VEGF111b بودند و در غلظت 0/3 درصد زیوسین، 61/9 61 درصد کلونی نوترکیب مشاهده شد. وجود توالی VEGF111b در باکتری های نوترکیب توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. نتیجه گیری: مطالعه حاضر گامی مهم در جهت تولید داروی نوترکیب VEGF111b و بررسی عملکرد ضد سرطانی این پروتیین است. وکتور pBudCE4.1 با دارا بودن 2 جایگاه کلونینگ و 8 جایگاه برش آنزیمی کاندید مناسبی برای کلونینگ و بیان پروتیین های نوترکیب در Ecoli Top10 است.

Keywords:

, E.coli , پروتیین نوترکیب , VEGF111b