بررسی امکان تهیه مارکر ژنتیکی‭(Luciferase gene)‬جهت نشان دار کردن و رد یابی بچه ماهیان سفید‭(frissi kutum Rutiluc) ‬یا کپور معمولی ‭(Cyprinus carpio) ‬بعنوان شاخص زیستی

برای اجرای این پروزه جهت دستیابی به ژن لوسیفراز از باکتری ویبریوفیشری استفاده گردید. برای این منظور باکتری مورد نظراز سازمان پژوهش های علمی و صنعتی ایران تهیه گردید. پس ازکشت درمحیط اختصاصی، ‭DNA ‬ژنومی باکتری به روش فنل کلروفرم استخراج شد. جهت تکثیر ژن های ‭LuxA ‬و ‭LuxB ‬از پرایمرهای اختصاصی که جایگاه های هضم آنزیمی ‭KpnI ‬و ‭BamHI ‬درسمت '5 آن تعبیه شده بوده ، استفاده گردید. محصول ‭PCR ‬پس ازخالص سازی درپلاسمید ‭PT‬‮‭257‬‭R ‬کلون گردید و سپس به سلولهای ‭Ecoli ‬منتقل شد. تایید کلون های نوترکیب به روش ‭PCR ‬بارایمرهای اختصاصی و هضم آنزیمی انجام گرفت. پس از تایید، قطعات ‭LuxA ‬و ‭LuxB ‬بترتیب در وکتور بیانی ‭PcDNA‬‮‭1.3‬‭\hug ‬و ‭PcDNA‬‮‭1.3‬‭\neo ‬کلون و جهت تایید آن از واکنش ‭PCR ‬با پرایمرهای اختصاصی و همچنین واکنش هضم آنزیمی استفاده شد. در نهایت پس از تایید، پلاسمیدهای نوترکیب ‭PcDNA‬‮‭1.3‬‭\hug ‬و ‭PcDNA‬‮‭1.3‬‭\neo ‬با استفاده از کیت اختصاصی به سلولهای یوکاریوتی ‭NIH‬3T3 منتقل شدند. جهت بررسی توانایی نورزایی سازه های ژنتیکی تهیه شده، از کشت سلولهای ‭NIH‬3T3 در حضور دکانال (بعنوان سوبسترا ) و غلظت های مختلف آنتی بیوتیک نیومایسین وهیگرومایسین استفاده شد. نتایج نشان داد که پس ازگذشت 2 ساعت ازاضافه شدن سوبسترا، واکنش نورزایی آغاز می شود و بتدریج با رسیدن به زمان 6 ساعت، میزان نورزایی افزایش قابل ملاحظه ای می یابد. علاوه برموارد فوق جهت تایید بیان و تولید پروتیین لوسی فراز، از روش ‭SDS-PAGE ‬و وسترن بلات استفاده شد که ایجاد باند پروتیین ‮‭76‬کیلودالتونی، موید صحت آزمایشات می باشد. کلمات کلیدی: لوسیفراز، فیبریوفیشری، انتقال ژن