تعیین توالی ژن، کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آیروجینوزا سویه SN۴ در اشریشیاکلی
Publish place: Biological Journal of Microorganisms، Vol: 4، Issue: 16
Publish Year: 1394
Type: Journal paper
Language: Persian
View: 265
This Paper With 11 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- I'm the author of the paper
Export:
Document National Code:
JR_BJM-4-16_003
Index date: 1 May 2021
تعیین توالی ژن، کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آیروجینوزا سویه SN۴ در اشریشیاکلی abstract
مقدمه: ال- آسپاراژیناز جایگاه با ارزشی از جنبه کاربردهای پزشکی و صنایع غذایی دارد. تقاضا برای این آنزیم دارویی هرساله چندین برابر میشود. مواد و روشها: در این پژوهش، یک آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه SN۴، تعیین توالی و در اشریشیاکلی کلون شد. پرایمرها بر اساس آل- آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه DSM۵۰۰۷۱ طراحی شدند که بر اساس توالی ژن ۱۶S rRNA شباهت بالایی را نسبت به سویه SN۴ نشان میداد. ژن آسپاراژیناز در معرض هضم آنزیمی توسط آنزیمهای برشی NdeI و XhoI قرار گرفت و سپس، به داخل پلاسمید pET۲۱a الحاق شد. محصول الحاق به درون سلولهای مستعد E. coli (DE۳) pLysS DH۵a با روش CaCl۲ ترانسفورم شد. سلولهای E. coli ترانسفورم شده در محیط LB آگار حاوی ۱۰۰ میکروگرم/ میلیلیتر آمپیسیلین و IPTG (۱mM) رشد داده شدند. نتایج: ال-آسپاراژیناز نوترکیب در باکتری BL۲۱ E. coli پس از ۹ ساعت انکوباسیون، به میزان بالایی القا شد و فعالیت آسپاراژینازی بالایی به میزان ۴/۹۳ واحد در میلیلیتر را نشان داد. ال- آسپاراژیناز نوترکیب تعیین توالی شد و نتایج همردیفی نشان داد که توالی پیشنهادی اسید آمینهایی آن از ۳۵۰ اسید آمینه تشکیل شده که شباهت بالایی با ال- آسپاراژینازهای سایر سودوموناس ایروجینوزها در حدود ۹۹ درصد را نشان میدهد. نتایج نشان میدهد که آل- آسپاراژیناز SN۴، باقیماندههای کاتالیزی و نواحی حفظ شده مشابه با سایر آسپاراژینازها را داراست. بحث و نتیجه گیری: پژوهش حاضر نخستین گزارش در مورد کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آایروجینوزا در اشریشیاکلی است که منبع بالقوهایی از ال- آسپاراژیناز را برای بررسی اثر ضدسرطانی آن هم در شرایط آزمایشگاه و هم در موجود زنده فراهم میکند.
تعیین توالی ژن، کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آیروجینوزا سویه SN۴ در اشریشیاکلی Keywords:
تعیین توالی ژن، کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آیروجینوزا سویه SN۴ در اشریشیاکلی authors
ارسطو بدویی دلفارد
دانشیار بیوشیمی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، ایران
زهرا کرمی
استادیار بیوشیمی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران
نرجس رمضانی پور
کارشناس ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :