استاندارد کردن PCR تشخیصی به وسیله اینترنال کنترل تکثیری
Publish place: Biological Journal of Microorganisms، Vol: 4، Issue: 15
Publish Year: 1394
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 460
This Paper With 15 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_BJM-4-15_007
تاریخ نمایه سازی: 12 اردیبهشت 1400
Abstract:
مقدمه: بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاهها به علت استاندارد نبودن، از معایب روشهای تکثیر مولکولی است. در بیشتر مقالات چاپ شده در زمینه تشخیص PCR عوامل عفونی، اینترنال کنترل تکثیری (IC) وجود ندارد. هدف از پژوهش حاضر، طراحی و توسعه یک روش ساده و سریع، برای ساخت اینترنال کنترل آزمون PCR در آزمایشگاههای تشخیصی است. مواد و روش ها: در پژوهش حاضر، برای ساخت اینترنال کنترل رقابتی، از پرایمرهای مرکب و روش PCR-Cloning استفاده شد. بدین ترتیب که پرایمرهای جلویی و عقبی تشخیص PCR ویروس هپاتیت) (HBV، ویروس هرپس سیمپلکس HSV))، مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (MTB)، مایکوپلاسما پنومونیه (Mpn)، کریپتوکوکوس نئوفورمنس (Cne)، جنس سالمونلا (Sal. sp) و جنس مایکوپلاسما (M. sp) را در بخش '۵ پرایمرهای ژن کینتوپلاست لیشمانیا، به شکل دم طراحی و سنتز شد. اینترنال کنترلهای تکثیری با پلاسمید pTZ۵۷R الحاق و در باکتری اشریشیاکلی JM۱۰۷ ترانسفورم شد. تعداد حداقل IC در هر واکنش PCR از طریق رقیقسازی و همینطور طیف پاسخ PCR همراه با IC بررسی شد. نتایج: HBV–HSV–MTB–MPN–Cne–Sal. sp– و M. sp با پرایمرهای اختصاصی به ترتیب برابر با ۲۷۲bp-۲۸۴bp-۴۱۵bp-۳۴۵bp-۲۴۵bp-۴۵۴bp-۲۶۲bp و محصول اینترنال کنترل هم به ترتیب ۶۷۲bp-۶۶۸bp-۶۶۱bp-۶۶۹bp-۶۶۰bp-۶۶۲bp-۶۶۰bp جفت باز بود، که از نظر اندازه، اختلاف مطلوبی بین محصول PCR و IC وجود دارد و به آسانی در ژل قابل تفکیک است. تعداد حداقل IC در هر واکنش، ۱۰۰۰ عدد تعیین شد. حداقل و حداکثر حساسیت آزمون PCR همراه با IC برای همه عوامل در حد مطلوبی به دست آمد. در آزمون ویژگی با عوامل مختلف هم، هیچ محصول ناخواستهای مشاهده نشد. بحث و نتیجه گیری: نتایج منفی و مثبت کاذب که به علتهای مختلف در روش PCR رخ میدهد از مشکلات مهم این روش جذاب است. استفاده از یک اینترنال کنترل در تشخیص مولکولی به عنوان کنترل داخلی، میتواند این خطاها را شناسایی کند.
Keywords:
Authors
محمد حسن شاه حسینی
دانشیار بیوتکنولوژیست، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهر قدس، تهران، ایران
مریم قهری
کارشناس ارشد میکروبیولوژی، موسسه ایرانیان ژن فناور (IGF)، تهران، ایران
محمد امین محمودی
کارشناس ارشد میکروبیولوژی، موسسه ایرانیان ژن فناور (IGF)، تهران، ایران
الهام مسلمی
استادیار سلولی و مولکولی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران شرق، تهران، ایران
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :