جداسازی، شناسایی و تعیین هویت مولکولی گونههای کریپتوسپوریدیوم در اسهال گوسالهها به روش multiplex nested-PCR

زمینه مطالعه: تشخیص گونه­های کریپتوسپوریدیوم براساس خصوصیات مورفولوژی بسیار محدود بوده و به تنهایی فاقد ارزش تاکسونومیک است، و لذا استفاده از روش­های مولکولی این محدودیت­ها را تا حدودی برطرف می­سازد. هدف: هدف از این مطالعه تعیین ژنوتیپ­های غالب کریپتوسپوریدیوم در گوساله­های مبتلا به اسهال بود. روش کار: مطالعه در گوسالههای کمتر از ۳ ماه و برای مدت ۲ سال انجام شد. در طول دوره مطالعه، ۱۶۰ نمونه مدفوع از گوسالههای جوان جمعآوری شده و ابتدا از طریق میکروسکوپی و سپس با استفاده از تکنیکهای مولکولی مورد بررسی قرار گرفت. مدفوع از جهت حضور اواوسیستهای کریپتوسپوریدیوم توسط روش شناورسازی با آب شکر شیتر و به دنبال آن روش رنگآمیزی ذیل نلسون  مورد بررسی قرار گرفت. دی ان آ انگل استخراج و پروتکل multiplex nested-PCR براساس ژن ۱۸srRNA جهت شناسایی سه گونه سازگار در گاو (یعنی کریپتوسپوریدیوم اندرسونی،  کریپتوسپوریدیوم بوویس و کریپتوسپوریدیوم رایانه) به علاوه گونه مشترک بین انسان و دام یعنی کریپتوسپوریدیوم پارووم انجام شد. نتایج: ۱۱۰ نمونه مدفوع از دامداری­های موجود در استان البرز و ۵۰ نمونه مدفوع نیز از دامداری­های شهر شاهرود جمع­آوری گردید. از ۱۶۰راس حیوان مورد آزمایش ۹۰ راس ماده و ۷۰ راس نر بودند. در مجموع در میان ۱۶۰ راس دام مورد آزمایش ۸۵ مورد (۱۲/۵۳ درصد) مبتلا به اسهال بودند که ۵۵ مورد (۳۷/۳۴درصد) از این تعداد حیوان تحت آزمایش با استفاده از رنگآمیزی ذیل نلسون مثبت تشخیص داده شدند. از آنجاییکه تمام موارد مثبت مربوط به نمونه­های اسهالی و مرتبط با گوساله­های زیر یک ماه بود، ارتباط معنی­داری مابین وضعیت اسهال و حضور این انگل مشاهده گردید (۰۵/۰p <). از نظر توزیع فصلی تفاوتی در میزان موارد اسهالی و موارد مثبت انگلی مشاهده نشد. حضور باند ۳۰۵ جفت بازی در کلیه نمونه­های مثبت ذیل نلسون موید حضور گونه کریپتوسپوریدیوم پارووم در تمامی نمونه­ها بود. نتیجهگیری نهایی: گوساله­های شیرخوار بیشتر با کریپتوسپوریدیومپارووم آلوده می­شوند که تحقیق حاضر نیز موید این مطلب بود.

Keywords:

انگل روده ای , کریپتوسپوریدیوم , گوساله , اسهال , جداسازی مولکولی