تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه ژیاردیا لامبلیا در خرگوش

چکیده مقدمه: ژیاردیا لامبلیا یکی از شایع ترین تک یاخته های روده ای انسان در سراسر جهان می باشد. تشخیص آن عمدتا از طریق مشاهده مستقیم صورت می گیرد ولی روشهای مبتنی بر ELISA، IFA، بعنوان تکنیکهای برتر، کاربردهای تحقیقاتی و اپیدمیولوژیکی دارد. برای طراحی تستهای قدرتمند با قدرت تشخیصی بالا نظیر دیپ استیک و یا کیت های تشخیصی سریع، اولین قدم تولید آنتی بادی پلی کلونال می باشد. لذا بر آن شدیم تا آنتی بادی پلی کلونال بر ضد ژیاردیا را در خرگوش تولید نماییم. مواد و روش ها: با استفاده از روش تغییر یافته گرادیان دو مرحله ای سوکروز، کیست ها خالص سازی شدند و غلظت آن ها به تعداد ۱×۱۰۶/ml در PBS رسانده شد و به خرگوش در چندین مرحله به فاصله سه هفته تزریق شد. تزریق مرحله اول با استفاده از ادجوانت کامل فروند و تزریق یادآور با استفاده از ادجوانت ناقص فروند و تزریق های بعدی بدون استفاده از ادجوانت بصورت عضلانی- جلدی صورت گرفت. پس از ایمونیزاسیون خرگوش، برای اثبات تولید آنتی بادی پلی کلونال ضد ژیاردیا و تعیین تیتر آن، تست IFA و ELISA طراحی گردید. یافته های پژوهش: نتایج بدست آمده در هر دو روش، بیانگر ایمن شدن خرگوش بود و با میزان ۱۰۶ انگل و رقت سرمی ۱۰۰/۱ و با رقت ۲۰/۱ Goaet anti rabbit IgG کونژوگه با FITC در زیر میکروسکوپ ایمنوفلورسانس، جواب کاملا قابل قبولی گرفته شد. در الایزا هم در تیترهای با میزان /ml۱۰۵ انگل و رقتهای کونژوگه ۵۰۰۰/۱ و ۱۰۰۰۰/۱، و سرمی ۱۰۰۰/۱ و ۲۰۰۰/۱، بهترین جوابها گرفته شد. نتیجه گیری نهایی: با توجه به اهمیت تشخیص آنتی ژن های ژیاردیایی در نمونه های مختلف و بالینی، تولید آنتی بادی پلی کلونال ضد G.Lamblia با تیتر بالا قدم اول و مهمی در راستای طراحی کیت های IFA و الایزای مستقیم با هدف تشخیص مستقیم آنتی ژن های ژیاردیا به شمار می رود که می توان در مراحل بعدی نسبت به خالص سازی آنتی بادی تولیدی و کونژوگه نمودن آن با آنزیم اقدام نمود.

Keywords:

Production , Giardia lamblia , Polyclonal antibody , تولید , آنتی بادی پلی کلونال , ژیاردیا لامبلیا