بهبود و توسعه میزان بیان ، حلالیت و تسهیل تخلیص آنزیم نوترکیب پروتئاز (rPR) ویروس HIV با روش TOPO-Cloning در باکتری BL۲۱   E.coli

اسعد آذر نژاد; ارشد حسینی; زهره شریفی

بهبود و توسعه میزان بیان ، حلالیت و تسهیل تخلیص آنزیم نوترکیب پروتئاز (rPR) ویروس HIV با روش TOPO-Cloning در باکتری BL۲۱ E.coli

Publish place: New Cellular Biotechnology - Molecular، Vol: 6، Issue: 21

Publish Year: 1394

Type: Journal paper

Language: Persian

This Paper With 8 Page And PDF Format Ready To Download

DOWNLOAD Paper

Certificate
I'm the author of the paper

این Paper در بخشهای موضوعی زیر دسته بندی شده است:

علوم پزشکی > ایدز

Export:

Link to this Paper:

https://civilica.com/doc/1331368

Document National Code:

JR_NCMBJ-6-21_002

Index date: 7 December 2021

بهبود و توسعه میزان بیان ، حلالیت و تسهیل تخلیص آنزیم نوترکیب پروتئاز (rPR) ویروس HIV با روش TOPO-Cloning در باکتری BL۲۱ E.coli abstract

سابقه و هدف : پروتئاز HIV نقش مهمی در بلوغ ویروس و تحریک پاسخ ایمنی میزبان دارد. به همین دلیل میتواند هم به عنوان یک هدف درمانی و هم در تست های تشخیصی کاربرد داشته باشد. در مطالعات قبلی، تولید rPR با مشکلاتی مثل سمیت، آبگریز بودن و تخلیص روبرو بوده است. هدف از این مطالعه، استفاده از سیستم بیانی pET۱۰۲/D.TOPO برای غلبه بر مشکلات اشاره شده بود. مواد و روش ها: پس از جداسازی ژن پروتئاز از ژنوم HIV، فرایند کلونینگ با استفاده از سیستم TOPO Cloning در وکتور بیانی pET۱۰۲/D.TOPO انجام شد. بعد از القای بیان ژن با IPTG، پروتئین تولید شده با استفاده از روش کروماتوگرافی حاوی ستون Ni-NTA تخلیص شد و غلظت آن با استفاده از کیت بررسی پروتئین BCA سنجیده شد. تولید پروتئین نوترکیب با SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ بررسی شد. یافته ها : کلونینگ ژن پروتئازHIV-۱ با استفاده از سیستم کلونینگ TOPO در وکتور بیانی pET۱۰۲/D بوسیله PCR با موفقیت صورت گرفت و با sequencing تایید شد. غلظت rPR پس از تخلیص بین ۶۰ تا ۸۵ میکروگرم در میلی لیتر بود. بیان و تولید rPR به شکل محلول، با موفقیت انجام شد. و با SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد. بحث و نتیجه گیری : در سیستم کلون سازی مورد استفاده به دلیل بیان rPR به صورت فیوز شده با تیوردوکسین و دارای برچسپهای هیستیدینی، مشکل سمیت،آبگریز بودن و تخلیص تا حد زیادی برطرف شد. با توجه به میزان rPR تولید شده، میتوان از آن در تست های تشخیصی و جهت بررسی و طراحی مهارکننده های پروتئاز در مطالعات بعدی استفاده کرد.

بهبود و توسعه میزان بیان ، حلالیت و تسهیل تخلیص آنزیم نوترکیب پروتئاز (rPR) ویروس HIV با روش TOPO-Cloning در باکتری BL۲۱ E.coli Keywords:

Human Immunodeficiency Virus , TOPO Cloning , protease , recombinant protein , HIV , کلون سازی مولکولی , پروتئاز , پروتئین نوترکیب

بهبود و توسعه میزان بیان ، حلالیت و تسهیل تخلیص آنزیم نوترکیب پروتئاز (rPR) ویروس HIV با روش TOPO-Cloning در باکتری BL۲۱ E.coli authors

اسعد آذر نژاد

Department of Medical Biotechnology, Allied Medical Sciences, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, I.R. Iran

ارشد حسینی

Department of Medical Biotechnology, Allied Medical Sciences, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, I.R. Iran

زهره شریفی

Department of Medical Biotechnology, Faculty of School of Allied Medical Sciences, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, I.R. Iran