دورگه سازی در محل بر روی جنین جوجه

سابقه و هدف: تکنیک  دورگه سازی در محل بر روی جنین (wmISH) یکی از ابزار های قدرتمند در بررسی جایگاه بیان رونوشت ژن در بافت های جنینی است. این مطالعه با هدف راه اندازی این تکنیک با استفاده از کاوشگر ضد الگوی آنزیم RALDH۲ که با دیگوکسی ژنین نشاندار شده بود انجام شد. مواد و روش ها: پس از جداسازی جنین جوجه در مراحل ابتدایی تکوین، آنها فیکس و آبگیری شدند و پس از بیرنگ شدن و تاثیر پروتئین کیناز K بر آنها ابتدا محلول دورگه سازی و بعد محلول دورگه سازی حاوی کاوشگر ضد الگوی آنزیم RALDH۲  به مدت ۳۶ ساعت بر آنها تاثیر داده شد. در نهایت پس از شستشو با محلول SSC و انکوبه شدن با آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین  به آنها محلول NBT/BCIP افزوده شد و جنین ها به محیط بافری NTMT  منتقل شدند. به دسته از جنین ها کاوشگر الگوی این آنزیم اضافه شد و به جنین های کنترل منفی نیز هیچ گونه کاوشگری افزوده نشد. یافته ها:  پس از گذشت ۳۶ ساعت به دنبال اتصال کاوشگر ضد الگوی آنزیم RALDH۲ به رونوشت های این آنزیم در سومایت های جنینی و نیز لوله های عصبی و قلبی جنین جایگاه حضور این رونوشت ها در بافت های مذکور به رنگ آبی مشاهده شدند. در گروه هایی که کاوش گر الگو اضافه شده بود و نیز گروه کنترل منفی سومایت ها و بافت عصبی رنگ نگرقته بودند. نتیجه گیری: با استفاده از تکنیک  wmISH  می توان ارزیابی دقیقی از مکان و میزان بیان رونوشت ژن ها در جنین به دست آورد.

Keywords:

whole-mount in situ hybridization , digoxygenin-labled riboprobe , دورگه سازی در محل بر روی جنین , کاوشگر RNA نشاندارشده با دیگوکس ژنین