بررسی بیان پروتئین های P۱۶ و DAPK در رده ی سلولی لوسمیک HL۶۰ در مجاورت با آلکالوئید گیاهی

مقدمه: تغییرات اپی­ژنتیک و از آن جمله متیلاسیون DNA در ناحیه پروموتور ژن های سرکوبگر تومور به عنوان یکی از مهم ترین مکانیسم­های ایجاد بدخیمی­های خونی مطرح است. امروزه استفاده از مواد طبیعی که دارای اثر هایپومتیلاسیون بر DNA می­باشند مورد توجه فراوان قرار گرفته است. Harmine یکی از آلکالوئیدهای مشتق از گیاه اسپند است که دارای خاصیت هیپومتیله کنندگی و ضدتکثیری بر روی رده ­های سلولی لوسمیک می­باشد. از آنجائی که ژن های P۱۶ و DAPK بعنوان ژن های سرکوبگر تومور در برخی بدخیمی­های خونی بصورت هایپرمتیله می­باشند، لذا در این مطالعه تاثیر آلکالوئید گیاهی Harmine بر تکثیر رده سلولی  HL۶۰ و بیان این دو ژن در این رده سلولی بررسی شد تا گامی در جهت روشن شدن مکانیسم اثر این داروی گیاهی و استفاده از مواد طبیعی در درمان سرطان­های خون برداشته شود. مواد و روش ها: رده سلولی لوسمیک  HL-۶۰ در فلاسک حاوی محیط کشت RPMI، سرم جنینی گوساله، پنی سیلین و استرپتومایسین در دمای ۳۷ درجه و دی اکسید کربن ۵ درصد به مدت ۵ روز کشت داده شد. تاثیر غلظت­های مختلف Harmine  بر تکثیر سلولی در مقایسه با ۵-azacytidine به روش دستی و با استفاده از لام نئوبار و رنگ تریپان بلو در ساعات مختلف ۲۴ ساعت ، ۴۸ ساعت و ۷۲ ساعت تعیین گردید. بیان ژن های P۱۶ و DAPK پس از ساخت cDNA و طراحی پرایمرهای اختصاصی در سایت NCBI، با روش Real-time PCR بررسی شد. آنالیز آماری داده­ها با نرم افزار SPSS انجام گرفت. یافته ­ها: نتایج بدست آمده نشان داد که Harmine در تمامی غلظت­ها موجب کاهش تکثیر سلولی می شود. بطوری که Harmine در غلظت­های g/mlµ ۲۵.۶ و ۱۰۲.۴ و پس از ۷۲ ساعت ، تکثیر سلولی را در مقایسه با نمونه کنترل به ترتیب به میزان۵۰ و ۷۸ درصد  کاهش داد (p<۰.۰۰۱). همچنین Harmine موجب افزایش بیانDAPK  می شود اما این افزایش به لحاظ آماری فقط در غلظت g/mlµ ۱۰۲.۴ و فقط در مورد DAPK  معنی دار است (p<۰.۰۰۵). بحث و نتیجه­ گیری: نتایج این مطالعه نشان داد کهHarmine  دارای خاصیت ضدتکثیری وابسته به دوز و زمان بر روی رده سلولی لوسمیکHL۶۰ است. همچنین Harmine موجب افزایش بیانDAPK  می شود که این مسئله با توجه به نتایج دیگر مطالعات می­تواند ناشی از هایپومتیله شدن پروموتور این ژن باشد. مطالعات بیشتر جهت روشن­تر شدن مکانیسم اثر Harmine بر سلول های سرطانی لازم است.

Keywords:

HL۶۰ , Harmine , P۱۶ , DAPK , Harmine , HL۶۰ , P۱۶ , DAPK