طراحی روشPCR بهینه شده جهت ردیابی ژن بتالاکتاماز وسیع الطیف نوع SHV

مقدمه: بتالاکتامازهای وسیع الطیف یکی از عوامل بسیار مهم مقاومت های آنتی بیوتیکی محسوب میشود مقاومت آنتی بیوتیکی در دهه اخیر به عنوان معضل جهانی مطرح گردیده است و دارای آمار مرگ و میر و تلفات بسیاری در سطح جهانی می باشد. بتالاکتامازهای وسیع الطیف یکی از مهمترین نوع شایع در مقاومت آنتی بیوتیکی می باشد.لذا تشخیص سریع و دقیق آن می تواند به منزله گامی بزرگ در حل این مشکل باشد. در این مطالعه هدف بررسی ژن SHV از بتالاکتامازهای وسیع الطیف با تست PCR است. مواد و روشها: ژن SHV از بانک ژنی استخراج و تراز وسط قرار داده شد. پرایمرهای اختصاصی PCR باتوجه به اجماع از ژن SHV طراحی شده بودند. یک پلاسمید حاوی کنترل مثبت ژن با استفاده از PCR و روش شبیه سازی ساخته شده است. ویژگی آزمایش با استفاده از DNA بروسلا ژنومی و یک پنل متشکل از ژنوم های موجودات ۱۰ گرم مثبت و ۱۰ گرم منفی مورد بررسی قرار گرفت. تست PCR با محصولات بسیار خاص و بدون محصولات تقویت کننده از ارگانیسم غیر SHV مشاهده شد. تست های دیگر از این ویژگی نیز با استفاده از CTX-M و بتالاکتاماز TEM مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج: در الکتروفورز محصول PCR باندی به طول bp۱۹۹ مطابق با طول توالی مدنظر رویت شد. نمایش قطعه مشابه در PCR پلاسمید نوترکیب محصول شبیه سازی شده حاوی ژن SHV را تایید می کند. زمانی که پلاسمید بر PCR –SHV قرار گرفت، یک الگوی نردبانی بر روی ژل آگارز مشاهده شد. الگو هرگز در گروه کنترل مشاهده نشد. نتایج حاصل از آزمایش نشان داد که آغازگر به طور جداگانه برای ژن SHV بود. بحث و نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشانگر این موضوع بود که تست PCR طراحی شده روشی آسان، سریع و ارزان در بررسی بتالاکتاماز وسیع الطیف نوع SHV میباشد.

Keywords:

Betalactamases , SHV , PCR , بتالاکتاماز وسیع الطیف , SHV , PCR