انتقال ژن به روش آگروباکتریوم و تحلیل گیاهان تراریخت در صنوبر سیاه هیبرید (Populus × euromericana Dode Guinier)

صنوبر سیاه هیبرید (Populus × euramericana)، گیاهی با کاربردهای مهم اقتصادی در صنایع خمیرچوب و کاغذ، سوخت زیستی و مواد نانوسلولزی و حذف آلودگی های خاک است. در این پژوهش، شیوه نامه انتقال ژن به روش آگروباکتریوم و باززایی مستقیم گیاه با استفاده از بافت میانگره ساقه صنوبر سیاه هیبرید ارائه و تحلیل مولکولی گیاهان تراریخت انجام شد. جهت باززایی گیاه کامل از کشت ریزنمونه­های میانگره ساقه در محیط کشت القای ساقه زایی حاوی محیط موراشیگ و اسکوگ (MS) و غلظت های مختلف ترکیباتBAP × IBA  و برای ریشه زایی (RIM) از محیط کشت القای ریشه زایی حاوی غلظت های IBA × NAA استفاده شد. با ارزیابی فاکتورهای فیتوهورمونی در باززایی مستقیم، بالاترین میزان باززایی ساقه (۲۸.۵۷ ساقه در هر ریزنمونه) از ریزنمونه های کشت شده در محیط کشت SIM حاوی ۰.۵ میلی گرم بر لیتر BAP و ۰.۰۵ میلی گرم بر لیتر IBA به دست آمد. بهترین ریشه­زایی ساقه­های باززا در محیط کشت RIM حاوی ۰.۱ میلی گرم بر لیتر IBA و ۰.۰۵ میلی گرم بر لیتر NAA تولید شد. ۱۰۰ درصد گیاهان باززا با محیط سازگار شده و به گلخانه منتقل گردیدند. نتایج مربوط به حساسیت به علف کش نشان داد که ۰.۵ میکرومولار Basta® سیستم گزینش دقیقی جهت مهار سلول های غیرتراریخت فراهم می آورد. بالاترین فراوانی انتقال ژن (۹۳.۳۳درصد) از طریق پیش کشت ریزنمونه ها به مدت ۶ روز و تلقیح آن ها با Agrobacterium tumefaciens سویه LBA۴۴۰۴ ( ۰.۶=OD۶۰۰ ) همراه ۱۰۰ میکرومولار استوسرینگان به مدت ۱۰ دقیقه به دست آمد. آنالیزهای لکه گذاری سادرن، RT-PCR و آزمون هیستوشیمیایی GUS به ترتیب درج یک تا دو نسخه ژن gus در DNA ژنومی و بیان پایدار آن را در گیاهان نسل T۰ منتخب تایید کرد. یافته های این تحقیق می تواند به ‎عنوان شیوه­نامه باززایی و انتقال ژن به گیاه صنوبر سیاه هیبرید مورد بهره برداری قرار گیرد.

Keywords:

Direct regeneration , GUS gene expression , Southern blotting , Internodal stem , Populus × euramericana , باززایی مستقیم , بیان ژن GUS , لکه گذاری سادرن , میانگره ساقه , Populus × euramericana