زیرهمسانه سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BD/A)

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین دارای ۷ سروتیپ از A-G می باشد. بهترین روش برای پیشگیری از سندرم حاصل از نوروتوکسین بوتولینوم (BoNT)، استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده از ناحیه اتصالی آن (به علت داشتن اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) می باشد. در این مطالعه ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) بررسی گردید روش بررسی: در ابتدا ژن ناحیه BoNT/A از GenBank با شماره دسترسی CP۰۰۰۷۲۷.۱ تهیه و براساس ترجیح کدونی E. coli، بهینه سازی کدون انجام شد. سپس در پلاسمید pET۲۸a، سنتز و بعد از آن در پلاسمید بیانی pGEX-۴T-۱، زیرهمسانه سازی شد. زیرهمسانه سازی با استفاده از روش PCR با آنزیم Pfu DNA polymerase و سپس برش دوگانه با آنزیم های XmaI و XhoI انجام گرفت. از سویه E. coli BL۲۱ به عنوان میزبان برای بیان استفاده شد. مارکر انتخابی برای pGEX-۴T-۱، آمپی سیلین بود. یافته ها: روش های PCR و برش محدودکننده با آنزیم های ذکرشده، زیرهمسانه سازی را تایید کردند. بررسی بیان با استفاده از روش های SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ (با استفاده از آنتی بادی اسبی ضدBoNT/A)، سپس کروماتوگرافی تمایلی گلوتاتیون انجام گرفت. با اینکه زیرهمسانه سازی با موفقیت انجام شد، ولی با به کارگرفتن روش های ذکرشده، هیچ گونه بیان پروتئین مشاهده نشد. نتیجه گیری: براساس نتایج این مطالعه، به نظر می رسد باید میزبان های دیگری مانند میزبان های یوکاریوتی برای بیان نوترکیب ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A مورد استفاده قرار گیرند.

Keywords:

Clostridium botulinum type A , Binding domain , Subcloning , Gene expression , Vaccines , Synthetic. , کلستریدیوم بوتولینوم تیپ A , ناحیه اتصالی , زیرهمسانه سازی , بیان ژن , واکسن نوترکیب