زیرهمسانه سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B (BD/B

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین دارای ۷ سروتیپ از A-G می باشد. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجادشده توسط BoNT/B، استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده از ناحیه اتصالی آن (به علت داشتن اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) است. در این پژوهش بیان زیرواحد اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B، به منظور کاندید واکسن مورد بررسی قرار گرفت. روش بررسی: ابتدا توالی ژن ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ  Bاز سایت NCBI با کد دسترسی EF۰۲۸۳۹۹.۱ گرفته شد. بعد از بهینه سازی کدون، ژن مورد نظر به صورت صناعی در داخل وکتور pUC۱۸ تهیه گردید. سپس این ژن در وکتور بیانی pET۳۲a(+) که دارای مارکر انتخابی آمپی سیلین می باشد، زیرهمسانه سازی شد. جهت تایید صحت زیرهمسانه سازی؛ از PCR، برش آنزیمی و تعیین توالی و برای بررسی بیان از سوش E. coli BL۲۱(DE۳) استفاده گردید. صحت بیان پروتئین با الکتروفورز (تحت شرایط مختلف و روش وسترن بلات) مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: واکنش های PCR، برش آنزیمی را براساس سایت های برشی در وکتور و در نهایت، تعیین توالی تایید کرد که ژن مورد نظر به طور مناسب در وکتور pET۳۲a(+)، همسانه سازی شد. بررسی بیان با استفاده از SDS- PAGE و متعاقب آن انجام وسترن بلاتینگ نشان داد پروتئین مورد نظر در سویه بیانی مذکور بیان نمی شود. نتیجه گیری: اگرچه ژن مورد نظر در داخل وکتورpET۳۲a(+)، به طور مناسب زیرهمسانه سازی گردید، با این حال هیچ بیان قابل مشاهده ای از ژن مورد نظر دیده نشد.

Keywords:

Clostridium botulinum , Gene expression , Vaccines , Synthetic. , کلستریدیوم بوتولینوم , بررسی بیان , واکسن نوترکیب.