همسان سازی و بیان نوترکیب دمین انتهای کربوکسیل پروتئین اینتیمین پاتوژن EHEC در باکتری اشرشیا کلی سویه BL۲۱(DE۳)

  چکیده   زمینه و هدف: بخشی از عفونت های روده ای به واسطه پاتوژن هایی به وجود می آ یند               که با مصرف مواد غذایی آلوده وارد سیستم گوارش انسان می شوند. در لانه گزینی باکتری         E. coli O۱۵۷:H۷ در روده بزرگ مجموعه ای از پروتئین ها که برخی از آنها شروع کننده این فرآیند بوده و فقدان آنها مانع از این پدیده می شود، دخیل هستند. هدف از انجام این پژوهش همسان سازی و بیان نوترکیب پلی پپتید انتهای کربوکسیل پروتئین اینتیمین به طول ۳۱۱ اسید آمینه به عنوان کاندید واکسن علیه E. coli O۱۵۷:H۷ بوده است.   .   روش بررسی : طراحی پرایمر اختصاصی برای ژن eae با استفاده از نرم افزارOligo  نسخه ۷ انجام شد و تکثیر ژن به وسیله واکنش PCR از روی DNA الگو صورت گرفت. واکنش های هضم آنزیمی و الحاق ژن، درون وکتور pET۲۸a(+) انجام شد. پس از تایید همسان سازی ژن، بیان نوترکیب پروتئین اینتیمین با استفاده از القاگر IPTG صورت گرفت. برای تایید پروتئین اینتیمین، آنالیز وسترن بلات انجام شد.   یافته ها: همسان سازی ژن eae درون وکتور pET۲۸a(+) به شکل مناسب بین جایگاه های مطلوب انجام شد و پروتئین اینتیمین پس از القا، بیان نوترکیب مناسب و قابل توجهی را نشان داد. آنتی بادی مورد استفاده در وسترن بلات نیز توانست به شکل مناسبی اینتیمین را شناسایی کند.   نتیجه گیری: در این مطالعه، سازه پایدار محتوی ژن eae ساخته شد که بیان نوترکیب قابل توجهی از پروتئین اینتیمین را از خود نشان داد. بنابراین، این سازه را می توان برای تولید پروتئین اینتیمین جهت مطالعات ایمنی زایی علیه E. coli O۱۵۷:H۷ به کار برد.  

Keywords:

Escherichia coli , C-terminal domain of intimin , Cloning , Recombinant protein. , اشرشیا کلی , انتهای کربوکسیل اینتیمین , همسان سازی , پروتئین نوترکیب. , اشرشیا کلی , انتهای کربوکسیل اینتیمین , همسان سازی , پروتئین نوترکیب.