خالص سازی لاکتوفرین جداشده از شیرگاو بوسیله کرماتوگرافی تمایلی

لاکتوفرین یک پروتئین چند عملکردی با خاصیت ضدمیکروبی است که خواص متنوع و شگفت آوری داردو می تواند کاندید مناسبی جهت کاربرد های بالینی و تجاری باشد.در این بررسی جهت جداسازی لاکتوفرین ابتدا پروتئین های قسمت آب پنیری شیر با استفاده از روش کروماتوگرافی تعویض یونی توسط CM sephadex C-۵۰ خالص و جهت تایید خالص سازی ، از آزمایش SDS-PAGE و نیز عدم ایجاد رنگ در حضور تترامتیل بنزدین استفاده شد. در ادامه خرگوش سفید نر نیوزلندی با µg/ml۱۲۰ لاکتوفرین و با استفاده از ادجوانت کامل و ناقص فروند به مدت ۶ هفته ، ایمن شد وپس از جدا سازی سرم با آزمایش های دات بلات و الایزا آنتی بادی اختصاصی تایید گردید. جهت خالص سازی آنتی بادی اختصاصی از روش رسوب دهی با سولفات آمونیوم ۴۰ درصد استفاده گردیدکه پس از تایید به سفارز فعال شده با سیانوژن متصل گردید، قسمت آب پنیری آغوز گاو از ستون کروماتوگرافی تمایلی عبورداده شد.بمنظور خالص نمودن لاکتوفرین، برای تشکیل کمپلکسی از آنتی ژن آنتی بادی واکنش داده و در نهایت سایر ترکیباتی که اتصال نیافته اند شسته شده وخارج می گردند.خالص سازی لاکتوفرین تایید و غلظت آن با آزمایش برادفورد محاسبه گردید.نتایج تحقیق نشان داد که روش ایمن نمودن، جهت تولید آنتی بادی اختصاصی بر علیه لاکتوفرین روشی مناسب بوده و خالص سازی لاکتوفرین ازشیرگاو با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی دارای بازده ۶۴ درصد می باشد.

Keywords:

, لاکتوفرین , کروماتوگرافی تمایلی