ایجاد جهش در ژن CENH۳ در گیاه گوجه فرنگی با استفاده از سیستم کریسپر
Publish place: The 4th International Congress of Agricultural Engineering, Natural Resources and Environment
Publish Year: 1401
نوع سند: مقاله کنفرانسی
زبان: Persian
View: 190
متن کامل این Paper منتشر نشده است و فقط به صورت چکیده یا چکیده مبسوط در پایگاه موجود می باشد.
توضیح: معمولا کلیه مقالاتی که کمتر از ۵ صفحه باشند در پایگاه سیویلیکا اصل Paper (فول تکست) محسوب نمی شوند و فقط کاربران عضو بدون کسر اعتبار می توانند فایل آنها را دریافت نمایند.
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
ISCAG04_026
تاریخ نمایه سازی: 20 بهمن 1401
Abstract:
کروموزومهای یوکاریوتی دارای ناحیه ای به نام سانترومر هستند که در آن پروتئین CENH۳ جایگزین هیستون H۳ در نوکلئوزومها شده و تعیین کننده ماهیت سانترومر .است طبق بررسیهای انجام شده دستورزی ژن CENH۳ در یکی از والدین منجر به حذف ژنوم آن والد طی تلاقی با والد تیپ وحشی و القاها پلوئیدی می.شود به علت اینکه روشهای کلاسیک تولید گیاهان هاپلوئید زمان بر هزینه بر و فاقد کارآیی لازم ،هستند دستورزی ژن CENH۳ به عنوان رهیافتی کارآمد برای القاهاپلوئیدی طی سالهای اخیر مورد توجه قرار گرفته است گوجه فرنگی از سبزیجات خانواده سولاناسه و یک محصول مهم در صنایع غذایی است عدم دستیابی به نرخ بالای هاپلوئیدی در گوجه فرنگی از طریق روشهای کلاسیک و کشت بافت بررسی رویکردهای جدید تولید گیاهان هاپلوئید را مورد توجه قرار داده است. هدف پروژه حاضر ویرایش ژن CENH۳ . گوجه فرنگی رقم Micro-Tom به منظور اختلال در عملکرد سانترومر از طریق سیستم CRISPR/Cas۹ میباشد. برای ویرایش ژن CENH۳ ابتدا guide RNA مورد نظر برای آن طراحی و به سازه CRISPR/Cas۹ منتقل گردید. پس از آن سازه حاصل به باکتری E. coli و سپس به اگروباکتریوم انتقال یافت پس از تایید توالی ،سازه کوتیلدونهای ۱۰ روزه گوجه فرنگی رقم Micro-Tom کشت شده در محیط MS در محیط تلقیح حاوی باکتریهای دارای سازه CRISPR/Cas قرار گرفتند و انتقال سازه به گیاه صورت گرفت سپس کوتیلدونهای تلقیح شده تا زمان القا گیاهچه در محیط دارای آنتی بیوتیک انتخابی به شکل متوالی واکشت شدند در نهایت به منظور تایید حضور سازه CRISPR در گیاهچه های حاصل استخراج DNA و واکنش PCR با پرایمرهای طراحی شده برای ژن Cas۹ انجام شد گیاهچه هایی که نتایج PCR در آنها مثبت بود از نظر فنوتیپی با نمونه های تیپ وحشی مورد بررسی قرار گرفتند سرعت رشد پایین تر آنها نشان دهنده اختلال در عملکرد ژن CENH۳ که یک ژن ضروری در روند تقسیم سلولی است میباشد. در مرحله بعد محصول PCR گیاهان ویرایش شده با استفاده از پرایمرهای طراحی شده در دو طرف ناحیه ویرایش شده ژن CENH۳ . برای شناسایی نوع ویرایش برای توالی یابی سنگر فرستاده خواهد شد و مورد بررسیهای بیشتر فنوتیپی و سیتوژنتیکی قرار خواهند گرفت. گیاهانی که ژن CENH۳ آنها ویرایش شده است به منظور اندازه گیری نرخ القاها پلوئیدی با تیپ وحشی تلاقی داده خواهند شد.
Keywords:
Authors
فاطمه قانعی استلخی
گروه بیوتکنولوژی کشاورزی دانشگاه تربیت مدرس، تهران
راحله کریمی آشتیانی
گروه بیوتکنولوژی کشاورزی دانشگاه تربیت مدرس، تهران