بیان و خنثی سازی گلیکوپروتئین نوترکیب روتا ویروس میمونی((NSP۴ با آنتی بادی اختصاصی در نوزاد موش

چکیده زمینه و هدف: روتا ویروس ها یکی از مهم ترین علل بیماری اسهال شدید در نوزادان و کودکان خردسال در کشورهای توسعه یافته و در حال توسعه در سراسر جهان می باشند. علی رغم تلاش جهت بهبود در وضع سلامت جامعه، متاسفانه بروز بیماری کاهش نیافته و استفاده از واکسن اولین روش پیشگیری است. بنابراین انجام مطالعات جهت تولید واکسن موثر به منظور کاهش شدت مرگ و میر و کنترل عفونت ضروری است. ژن قطعه ۱۰، که گلیکوپروتئین غیر ساختمانی ویروس روتا (NSP۴) را کد می کند به عنوان عامل جدیدی جهت توسعه واکسن علیه روتا ویروس مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این تحقیق بررسی بیان کامل ژن NSP۴ روتا ویروس میمونی (SA۱۱) در E.coli و بررسی خواص بیولوژیکی و ایمنی زایی آن در مدل حیوانی می باشد. مواد و روش ها: این مطالعه تجربی، به منظور مطالعه نقش بیولوژیکی NSP۴ در عفونت های روتاویروسی پروتئین نوترکیب NSP۴ در پلاسمید بیانی (+)pET-۲۶a انجام شد. بیان پروتئین نوترکیب NSP۴ با روش های Western blot با استفاده از آنتی بادی علیه عصاره سلول آلوده به روتا ویروس میمونی آزمایش گردید. پروتئین نوترکیب NSP۴ خالص و به خرگوش نر ۶ ماهه تزریق شد و آنتی بادی علیه آن فراهم گردید. پس از آن مقدار یک میکرومول به طور داخل صفاقی تزریق شد هم چنین مقدار ۱۰۰ میکرومول از راه دهان به نوزادان موش ۵-۴ روزه داده شد و اثر آن مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: بیان پروتئین نوترکیب NSP۴ با روش های Western blot با استفاده از آنتی بادی علیه عصاره سلول آلوده به روتا ویروس میمونی تایید گردید. تزریق داخل صفاقی NSP۴ باعث اسهال در نوزاد موش ۵-۴ روزه BALB/C شد. بیماری اسهال در گروه هایی که آنتی بادی علیه پروتئین نوترکیب میمونی دریافت کرده بودند (گروه آزمون) به طور معنی داری در مقابل گروه کنترل که فقط به آن ها ویروس تجویز شده بود (کنترل مثبت) و سرم خرگوش ایمونیزه شده را دریافت نکرده بودند کاهش یافت (۰۰۰/۰p<). نتیجه گیری: نتایج حاصل از این مطالعه بیان موفقیت آمیز طول کامل پروتئین نوترکیب NSP۴ را در E.coli همراه با حفظ خواص آنتروتوکسینی در E.coli نشان می دهد که می تواند باعث القای اسهال در نوزاد موش شود. هم چنین این پروتئین به عنوان یک آنتی ژن جهت تشخیص آنتی بادی اختصاصی علیه NSP۴ در سرم انسانی می تواند مورد استفاده قرارگیرد. واژه های کلیدی: بیان، روتاویروس، نوترکیب، نوزاد موش، گلیکوپروتئین غیرساختمانی، (+)pET-۲۶a

Keywords:

Expression , Rotavirus , Neonatal Mice , Recombinant , NSP۴ , pET-۲۶a(+) , بیان , روتاویروس , نوترکیب , نوزاد موش , گلیکوپروتئین غیرساختمانی , (+)pET-۲۶a