کلونینگ و بیان ژن اورات اکسیداز استرپتومایسس جدا شده از دریا در باکتری اشریشیاکلی اوریگامی

زمینه و هدف: استرپتومایسس ها باکتری های رشته ای گرم مثبت و هوازی هستند که از منابع متفاوت جدا می شوند. این باکتری ها توانایی تولید متابولیت های ثانویه و مواد فعال بیولوژیکی را دارند و از این جهت در زمینه بیوکنترل بسیار حائز اهمیت هستند. اورات اکسیداز یکی از فراورده های آنزیمی میکروبی است که از منابع مختلفی از جمله استرپتومایسس قابل استخراج است. این مطالعه به منظور کلونینگ و بیان ژن اورات اکسیداز استرپتومایسس جدا شده از دریا در باکتری اشریشیاکلی اوریگامی انجام شد. روش بررسی: در این مطالعه توصیفی تعداد ۶۰ نمونه آب و رسوب از اعماق متفاوت سواحل دریای خزر در استان مازندران جمع آوری گردید. آزمون های رنگ آمیزی گرم، متیل رد،VP، سیترات، هیدرولیز نشاسته، هیدرولیز کازئین، احیا نیترات، اکسیداز وکاتالاز برای تعیین هویت و جداسازی استرپتومایسس دریا انجام شد. ژن اورات اکسیداز توسط روش کلونینگ T-A با استفاده از وکتور PTG-۱۹ در درون میزبان اشریشیاکلی اوراگامی کلون گردید. بیان ژن کلون شده در کلنی های نوترکیب توسط روش Real time PCR بررسی شد. با استفاده از نرم افزارهای clustalX و Mega۵درخت فیلوژنی رسم گردید. یافته ها: غربالگری نمونه های آب دریا ۱۲ ایزوله استرپتومایسس را شناسایی کرد که همگی دارای ژن اورات اکسیداز بودند. بیان ژن اورات اکسیداز در اشریشیاکلی اوریگامی توسط روش Real-Tima PCR به اثبات رسید. نتایج بررسی های فیلوژنتیکی، برخی خویشاوندان نزدیک استرپتومایسس را به عنوان کاندید مطالعات بعدی معرفی نمود. نتیجه گیری: باکتری استرپتومایسس می تواند به عنوان منبع غنی از متابولیت های ثانویه با کاربردهای فراوان مورد توجه قرار گیرد و به عنوان سویه ای بومی به منظور تولید آنزیم اورات اکسیداز به کار رود. با به کار بردن میزبان های کلونینگ مختلف و بررسی شرایط بهینه تولید، این سویه می تواند نامزد مطالعات آینده به منظور ساخت داروها و ترکیبات ضدمیکروبی باشد.

Keywords:

Cloning , Urate Oxidase , Real Time PCR , Caspian Sea , کلونینگ , اورات اکسیداز , Real Time PCR , دریای خزر