تشخیص سریع مایکوپلاسما پنومونیه به روش تکثیر هم دما به واسطه حلقه (LAMP)

زمینه و هدف : باکتری مایکوپلاسما پنومونیه یکی از عوامل بسیار مهم در پیدایش عفونت های تنفسی است. روش های تشخیص سرولوژیکی و مولکولی هر کدام دارای محدودیت هایی هستند؛ به همین دلیل امکان استفاده از آنها در همه مراکز تشخیصی وجود ندارد. این مطالعه به منظور تشخیص سریع مایکوپلاسما پنومونیه با کمک پرایمرهای اختصاصی طراحی شده ویژه ناحیه P۱ adhesin به روش تکثیر هم دما به واسطه حلقه انجام شد. روش بررسی : در این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی ۹۲ نمونه بالینی از بیماران با پنومونی آتیپیک جمع آوری گردید. DNA نمونه ها با جوشاندن استخراج شد. ۶ جفت پرایمر ویژه برای تکنیک LAMP به وسیله نرم افزار Primer Explorer ver ۴ طراحی گردید. محصول LAMP به وسیله اضافه کردن سایبرگرین تشخیص داده شد. آزمون های حد تشخیص و ویژگی روی تست LAMP بهینه شده انجام شد؛ سپس آزمون بهینه شده بر روی نمونه ها انجام گردید. یافته ها : تست LAMP با استفاده از قطعه بزرگ آنزیم BST در ۶۶ درجه سانتی گراد و زمان یک ساعت بهینه گردید. حد تشخیص آزمون در حد ۱ CFU به دست آمد و با هیچیک از DNA عوامل مورد آزمون در ویژگی، تکثیری مشاهده نشد. از ۹۲ نمونه بالینی جمع آوری شده توسط تکنیک LAMP ۷۳ مورد (۸۰درصد) مثبت و ۱۹ مورد (۲۰درصد) منفی تشخیص داده شدند. نتیجه گیری : تکنیک تکثیر هم دما به واسطه لوپ روشی ساده، مناسب و در دسترس برای شناسایی مایکوپلاسما پنومونیه است.

Keywords:

Atypical pneumonia , Mycoplasma pneumoniae , Loop mediated isothermal amplification , پنومونی آتیپیک , مایکوپلاسماپنومونیه , تکثیر هم دما به واسطه حلقه