شناسایی اپی توپ های سلول T مربوط به آنتی ژن MPB۵۱ مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در موش های BALB/c

زمینه و هدف: سلول های T کمکی نوع یک (Thl) و لنفوسیت های CD۸+T نقش به سزایی در برقراری حفاظت مقابل عفونت با مایکوباکتریوم توبرکلوزیس دارند. MPB۵۱ یکی از پروتیین های ترشحی مایکوباکتریوم می باشد که باعث تحریک پاسخ های ایمنی هومورال و سلولی در طی عفونت با باسیل های سل می گردد. هدف از این مطالعه شناسایی اپی توپ های غالب لنفوسیت های T از مولکول MPB۵۱ در موش های BALB/c می باشد.روش بررسی: این مطالعه تجربی از تیر ماه ۱۳۸۱ لغایت اسفند ماه ۱۳۸۱ انجام گردید. DNA کد کننده مولکول MPB۵۱ ابتدا در پلاسمیدهای pCI کلون گردید. پس از ایجاد گلوله های ژنی حاوی ذرات طلای پوشیده شده از ژن MPB۵۱، با استفاده از تفنگ ژنی (Gene gun) موش های سفید نژا د BALB/c مورد واکسیناسیون قرار گرفتند. دو هفته بعد از آخرین ایمن سازی سلول های طحالی استخراج شد و در حضور یا عدم حضور مجموعه ای از پپتیدهای هم پوشان سنتتیک توالی کامل مولکول MPB۵۱ در محیط کشت RPMI۱۶۴۰ حاوی ۱۰در صد FCS کشت داده شد. تولید IFN-γ داخل سلول و سوپ کشت سلولی به ترتیب با روش فلوسیتومتری و ELISA بررسی گردید.یافته ها: نتایج نشان داد که واکسیناسیون DNA باعث ایجاد پاسخ ایمنی قوی تنها در برابر پپتید حاوی اسید آمینه ۴۰-۲۱P می شد. آنالیز های بیشتر با استفاده از الگوریتم های کامپیوتری امکان شناسایی اپی توپ نه اسید آمینه ای ۳۲-P۲۴ را به عنوان اپی توپ غالب سلول CD۸+T فراهم نمود.نتیجه گیری: این تحقیق مشخص ساخت کمپلکس MHC کلاس یک - پپتید (P۲۴-۳۲/H۲-Dd) توسط سلول های T سیتوتوکسیک (CTL) تولید کننده IFN-γ شناسایی می گردد. با استفاده از روش حذف دستجات لنفوسیت های T مشاهده شد لنفوسیت های CD۸+T تنها سلول های پاسخگو در برابر پپتید ایمونوژن ۳۲-۲۴P در موش های BALB/c می باشند. نتایج به دست آمده از این تحقیق علاوه بر آنکه به شناخت مکانیسم های پاسخ های ایمنی سلولی در برابر توبرکلوزیس کمک می نماید، در طراحی واکسن موثرتری در مقابل عفونت M.tuberculosis نیز مفید خواهد بود.

Keywords:

T-cell epitope , Tuberculosis , MPB۵۱ , DNA vaccine , اپی توپ سلول T , توبرکلوزیس , MPB۵۱ , واکسن ژنتیکی