ارزیابی روش Real-time PCR Multiplex به منظور شناسایی گونه های شایع باکتری بروسلا

سابقه و هدف: بیماری بروسلوز یک بیماری مشترک انسان و دام است. با توجه به ویژگی هایی مانند سخت رشد بودن، خطرات مرتبط با کشت و وجود واکنش های متقاطع با باکتری های دیگر در آزمون سرولوژیک، در مطالعه حاضر روش Real-time PCR Multiplex به منظور شناسایی گونه های شایع باکتری بروسلا (Brucella) ارزیابی شد. مواد و روش ها: این مطالعه تجربی در دانشگاه علوم پزشکی همدان و در سال ۱۳۹۴ در دو مرحله بیوانفورماتیکی و آنالیتیکی صورت گرفت. در مطالعه حاضر، یک پرایمر همگانی برای شناسایی همه ی گونه های جنس بروسلا و دو پرایمر اختصاصی دیگر برای گونه های بروسلا ملی تنسیس (B. melitensis) و بروسلا آبورتوس (B. abortus) که بیشترین شیوع را دارند، طراحی شد. ژن های ITS، BMEII-۰۴۶۶ و BruAB۲-۰۱۶۸ به عنوان ژن های هدف به ترتیب برای جنس بروسلا، بروسلا ملی تنسیس و بروسلا آبورتوس انتخاب گردیدند. اختصاصیت و حساسیت پرایمرها نیز در مرحله آنالیتیکی ارزیابی شدند. یافته ها: پرایمر همگانی، جنس بروسلا را در ۸۳ جفت باز و دمای ذوب معادل ۵/۸۲ درجه سانتی گراد شناسایی می کند. به طور اختصاصی، پرایمرهای بروسلا ملی تنسیس و بروسلا آبورتوس به ترتیب در ۱۲۱ و ۲۸۵ جفت باز و دماهای ذوب معادل ۸۴ و ۸۷ درجه سانتی گراد، این باکتری ها را شناسایی می کنند. حساسیت به دست آمده برای پرایمر همگانی و بروسلا آبورتوس، fg ۵۰ و برای بروسلا ملی تنسیس fg ۱۰۰ بود. استنتاج: با توجه به نتایج به دست آمده توسط این مطالعه، پرایمرهای طراحی شده حساسیت و اختصاصیت قابل قبول و بالایی از خود نشان دادند که می توان برای ارزیابی آن ها در آزمایش های کلینیکی به همراه روش کشت استفاده کرد.

Keywords:

B. abortus , B. melitensis , multiplex , real-time PCR , بروسلا آبورتوس , بروسلا ملی تنسیس , multiplex , real-time PCR