بررسی ایمنی زایی نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین نوترکیب ناحیه اتصال دهنده نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در موش

چکیده سابقه و هدف: نوروتوکسین های باکتری کلستریدیوم بوتولینوم از قوی ترین سموم شناخته شده می باشند که سبب بروز سندروم خطرناک بوتولیسم در انسان و حیوان می شوند. تحقیقات نشان داده است که زیر واحد اتصالی این سم دارای خاصیت ایمنی زایی بوده و میتواند در تهیه واکسن نوترکیب مورد استفاده قرار گیرد. از آن جا که واکسن های نوترکیب به تنهایی قادر به برانگیختن موثر پاسخ های ایمنی نیستند، استفاده از ادجوانت های زیست سازگار و ایمن از اهمیت زیادی برخوردار است. در سال های اخیر مطالعات زیادی جهت استفاده از نانوذرات به عنوان ادجوانت و نیز بستری جهت رسانش واکسن صورت گرفته است. هدف از این تحقیق، بررسی اثر نانوذرات کیتوسان بر روی رسانش موثر یک کاندید واکسن نوترکیب علیه نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E بود. مواد و روش ها: بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب ناحیه اتصالی BoNT/E در باکتری E. coli BL۲۱ (DE۳) صورت پذیرفت. نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین مذکور با روش ژلاسیون یونی ساخته شد و به صورت زیرجلدی به موش تزریق گردید. همزمان، آنتی ژن مورد نظر همراه با ادجوانت فروند نیز به گروه موشی جداگانه، تزریق شد و در نهایت میزان تیتر آنتی بادی IgG با روش الایزای غیرمستقیم مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: پروتئین نوترکیب ناحیه اتصالی BoNT/E، بیان و تخلیص شد و سپس به وسیله وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. میزان بارگذاری پروتئین در نانوذرات بیش از ۹۰ درصد بود. نتایج الایزا نشان داد که میزان تولید آنتی بادی IgG پس از هربار تزریق افزایش یافته است. استنتاج: نتایج این تحقیق نشان می دهد نانوذرات کیتوسان توانایی تحریک موثر سیستم ایمنی هومورال را دارد.

Keywords:

BoNT/E recombinant protein , chitosan nanoparticles , adjuvants , antibody assay , پروتئین نوترکیب BoNT/E , نانوذرات کیتوسان , ادجوانت ها , سنجش آنتی بادی