ارزیابی کینتیکی آنزیم نیتریک اکسید سنتاز استخراج شده از کلیه گوسفند

سابقه و هدف: نیتریک اکسید (NO) از طریق نیتریک اکسید سنتاز (NOS) و از ال- آرژینین تولید شده و در پروسه های فیزیولوژیکی و پاتولوژیکی متعددی از سیستم های بیولوژیکی نقش دارد. در این بررسی، فعالیت های کینتیکی NOS جدا شده از کلیه گوسفند مورد ارزیابی قرار گرفت. مواد و روش ها: با استفاده از تکنیک های هموژنیزاسیون، رسوب توسط سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی ستونی روی DEAE-۳۲سلولز و'۲، '۵-ADP-آگاروز، آنزیم NOS از ۵۰۰ گرم از بافت کلیه گوسفند، جدا و خالص سازی شد. در هر مرحله از روند خالص سازی این آنزیم، مقدار پروتئین و فعالیت آن با استفاده از روش های برادفورد و گریس بررسی شد. یافته ها: در این بررسی، وزن ملکولی NOS کلیه گوسفند در الکتروفورزSDS-PAGE، ۵۴ کیلو دالتون بود. فعالیت ویژه، ۶/۰ واحد بر میلی گرم پروتئین و بازده خالص سازی آن نیز ۹/۰ درصد (خلوص نسبی ۲۰ برابر) به دست آمد. pH و دمای اپتیم این آنزیم نیز به ترتیب ۴/۷ و ۳۰ درجه سانتیگراد به دست آمد و انکوباسیون پروتئین نشان داد که در محدوده دمایی ۱۰ تا ۳۰ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه، آنزیم پایدار می باشد. در غلظت ۷۵ میکرو مول از سوبسترای ال-آرژینین، بیشترین فعالیت NOS مشاهده شد. Vmax و Km آنزیم به ترتیب ۲۵۰ نانو مول در دقیقه در میلی گرم پروتئین و ۳۲/۵ میکرومول به دست آمد. استنتاج: نزیم NOS از کلیه گوسفند با خلوص نسبی ۲۰ برابر خالص سازی شد و دمای اپتیمم، pH، غلظت مناسب سوبسترا، Vmax و Km آن به ترتیب ۳۰ درجه سانتیگراد، ۴/۷، ۷۵ میکرومول، ۲۵۰ نانو مول در دقیقه در میلی گرم پروتئین و ۳۲/۵ میکرومول به دست آمد.

Keywords:

Nitric oxide synthase (NOS) , kinetic activity , sheep , kidney , نیتریک اکسید سنتاز (NOS) , فعالیت کینتیکی , گوسفند , کلیه