طراحی و ساخت کلون بیان کننده داروی ضد انعقادی دسیرودین (هیرودین) به شکل خارج سلولی در اشرشیا کلی

سابقه و هدف: هیرودین پلی پپتیدی با ۶۵ تا ۶۶ اسید آمینه است که به عنوان داروی ضدانعقادی، از غدد بزاقی زالو ترشح می شود. این دارو، مهارکننده بسیار قوی ترومبین می باشد بنابراین می تواند رقیبی برای هپارین نیز باشد. هدف از این مطالعه، الحاق توالی سیگنال پپتید pelB (توالی سیگنال پپتید pelB روی سکانس پلاسمید pET-۲۲b تعبیه شده است) و بررسی بیان پروتئین نوترکیب هیرودین در اشرشیاکلی می باشد. مواد و روش ها: ترادف ۶۶ آمینواسیدی واریانت HV۳ ژن هیرودین تهیه و به داخل یک وکتور بیانی قوی (pET-۲۲b) انتقال داده شد. برای تسهیل در تخلیص پروتئین از His-tag در ناحیه N-ترمینال ژن استفاده گردید. سیگنال پپتید pelB در ابتدای ژن با هدف ترشح به فضای پری پلاسمیک و محیط کشت درج شد و ساختار پلاسمیدی حاصله توسط سویه OrigamiB (DE۳) باکتری E.coli بیان شد. در نهایت میزان بیان پروتئین تولیدی در ناحیه سیتوپلاسم، فضای پری پلاسمی و محیط کشت مقایسه گردید. یافته ها: نتایج به دست آمده نشان می دهد که مقدار پروتئین بیشتری در فضای پری پلاسمیک بیان شده و مقدار کمی پروتئین نیز به محیط کشت ترشح گردیده است. استنتاج: با به کارگرفتن وکتورهایی که قادر به انتقال پروتئین هدف به فضای پری پلاسمیک، که محیطی بسیار مطلوب برای شکل گیری باندهای دی سولفید و فلدینگ صحیح پروتئین هدف هستند، احتمال تشکیل اینکلوژن بادی ها کاهش یافته و تولید پروتئین های محلول و فعال افزایش می یابد.

Keywords:

pelB signal sequence , hirudin , desirudin , anticoagulant , periplasmic , سیگنال پپتید pelB , هیرودین , دسیرودین , ضد انعقادی , پری پلاسمیک