جدا نمودن ژن تنظیمی استرپتومایسین فاقد پروموتر [StrR۲] از استرپتومایسز گریزئوس

سابقه و هدف: استفاده از PCR برای شناسایی و جدا نمودن ژن ها یک روش نسبتا سریع و دقیق می باشد. نکته قابل تامل در این تکنیک هدفمند طراحی نمودن پرایمرهای مورد استفاده می باشد. پرایمرها طوری طراحی می شوند که نه تنها ویژگی های ژنوم در نظر گرفته شود، بلکه کلونینگ ژن نیز منظور و یا به عبارت دیگر تسهیل گردد. آنتی بیوتیک استرپتومایسین توسط استرپتومایسز گریزئوس با به کار بردن دسته ژنی Str با بیش از ۲۵ ژن تولید می شود. این دسته ژنی دارای ژن StrR است که پروتئین تنظیم کننده اختصاصی این دسته ژنی را کد می نماید. هدف از این تحقیق جدا نمودن ژن StrR۲ بدون پروموتر آن و سپس کلونینگ آن بود.مواد و روش ها: جهت جدا نمودن ژن StrR بدون پروموتر ذاتی خود، StrR۲ فاقد پروموتر آغازگرهای مختلفی طراحی گردید. یک جفت از این آغازگرها (St Nes)، ژن StrR را در ژنوم شناسایی کرد و همچنین Nested-PCR برای شناسایی ژن StrR۲ تکثیر شده نیز به کار رفت. در سایر آغازگرها (Str nP۲ و Str nP۱) جایگاه های BamHI و XbaI طراحی شد، این آغازگرها نه تنها ژن StrR۲ را تکثیر کردند، بلکه جایگاه های برش آنزیمی در قطعات تکثیر شده را نیز ایجاد کردند.یافته ها: ژن StrR۲ فاقد پروموتر با استفاده از PCR تکثیر گردید و ساختار آن مورد تایید قرار گرفت. کلونینگ این ژن به طور موفقیت آمیز صورت گرفت. سپس ساختار پلاسمیدهای نوترکیب با استفاده از روش های مختلف چون الکتروفورز،PCR وهضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت.استنتاج: با استفاده از این وکتور می توان ژن StrR۲ فاقد پروموتر را در وکتورهای ویژه استرپتومایسز که واجد پروموترهای القایی هستند ساب کلون نمود.

Keywords:

Streptomycin , promoterless StrR۲ gene , Streptomyces griseus , استرپتومایسین , ژن StrR۲ فاقد پروموتر , استرپتومایسز گریزئوس