تهیه سازه های مناسب به منظور بیان ژن اینترفرون گامای انسانی در Leishmania tarentolae

مقدمه و هدف: افزایش کاربردهای درمانی برای اینترفرون گامای انسانی نوترکیب (hrIFNg) که یک سایتوکین پیش­التهابی ضدویروسی است، موجب گسترش روش­های بهینه­سازی تولید آن شده­است؛ در این مطالعه، تولید این گلیکوپروتئین در سیستم یوکاریوتی تک­سلولی Leishmania tarentolae که از مارمولک tarentolae annularis به­دست­می­آید، برای بیان ژن هترولوگ مورد بررسی قرارگرفته­است.    مواد و روش­ها: به­منظور تکثیر cDNA ژن IFNg از روش RT-PCR روی سلول­های تک­هسته­ای خون محیطی تحریک­شده با فیتوهماگلوتینین یک فرد ایرانی سالم استفاده­شد و به­منظور بیان پروتئین hrIFNg، cDNA تکثیرشده در دو کاست بیانی کلون شد. به نحوی که هر کاست بیانی دارای یک کپی از ژن hIFNg بود؛ این کاست­های بیانی با روش الکتروپوریشن در جایگاه ژن RNA ریبوزومی (ssu) L. tarentolae وارد شدند. پس از ترانسفورم، کلون­های ترانسفورم­شده در حضور آنتی­بیوتیک­های اختصاصی انتخاب­شدند.    نتایج: سازه­های مورد نیاز بیان اینترفرون گامای انسانی در سلول­های L. tarentolae تهیه و به داخل سلول انگل وارد شد و کارایی سازه­ها، با تکنیک وسترن بلات تاییدشد.   نتیجه­گیری: تاکنون انواع مختلفی از سلو­ل­های پروکاریوتی و یوکاریوتی به­عنوان سیستم­های بیانی در تولید پروتئین­های نوترکیب استفاده­شده­اند ولی به دلیل ویژگی­هایی، اغلب در بیان این گلیکوپروتیین ناموفق بوده­اند. سیستم به­کار­رفته در این مطالعه از خصوصیاتی ویژه­ ازقبیل سرعت رشد بالا، شرایط کشت ارزان و گلیکوزیلاسیون مناسب گلیکوپروتیین­ها بهره­مند است که می­تواند برای تولید پروتئین نوترکیب به­کاررود.

Keywords:

اینترفرون گامای انسانی نوترکیب , جایگاه ریبوزومی (ssu) , لیشمانیا تارنتولی