Codon Optimization of Stem Cell Factor (SCF) gene and evaluation of this gene expression using vector pBudCE۴.۱ in Chinese Hamster Ovary cells (CHO)

زمینه و هدف: فاکتور سلول بنیادی (SCF) یک سایتوکاین خونی است که می تواند از طریق تاثیر بر روی سلول های مولد خون ساز در تمایز سلول های پیش ساز خونی، بقاء، تکثیر و تمایز ماست سل ها و همچنین افزایش تکثیر و تهاجم سلول های توموری بااهمیت باشد و نقش درمانی آن در بهبود بیماری هایی نظیر آلزایمر و سکته های قلبی در حال بررسی و تحقیق است. هدف از این تحقیق کلون سازی ژن SCF به وسیله حامل بیانی pBudCE۴.۱ با بهینه سازی کدون در سلول های تخمدان همستر چینی (CHO) بود. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی توالی SCF بعد از بهینه سازی کدون برای سلول های CHO و تغییر دادن محتوی G+C به میزان بهینه به صورت سنتتیک ساخته شد و در وکتور بیانی pBudCE۴.۱ ساب کلون شد. سپس ژن SCF به همراه پلاسمید موردنظر به درون سلول های CHO-K۱ ترانسفکت شد و با استفاده از RT qPCR میزان بیان ارزیابی گردید. نتایج: حامل بیانی نوترکیب pBudCE۴.۱/SCF ساخته شد و با تکنیک PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی مورد تائید قرار گرفت. نتایج RT qPCR نشان داد که ژن SCF پس از بهینه سازی کدون در سلول های CHO می تواند بیان شود. نتیجه گیری: نتایج نشان داد که به خوبی می توان نسبت به همسانه سازی ژن SCF از طریق حامل بیانی pBudCE۴.۱ اقدام کرد و این حامل بیانی می تواند یک حامل مناسب برای بیان ژن SCF در سلول های CHO باشد.

Keywords:

Codon optimization , Cloning , Chinese Hamster Ovary Cells (CHO) , Stem Cell Factor (SCF) , بهینه سازی کدون , فاکتور سلول بنیادی (SCF) , سلول های تخمدان همستر چینی (CHO) کلونینگ