Cloning and Expression of Helicobacter Pylori CagA Gene Antigenic Regions in E. coli

زمینه و هدف: هلیکوباکتر پیلوری شایع ترین پاتوژن گوارشی است که نیمی از مردم دنیا را آلوده ساخته و مهمترین علت بیماریهای معدهای-رودهای از جمله گاستریک مزمن، زخم معده و دوازدهه، سرطان معده و لنفوما است. ژن CagA )سیتوتوکسین مرتبط با ژن A ( یکی از مهمترین شاخصهای بیماری زای این باکتری است. هدف از این تحقیق ساخت ناقل نوترکیب حامل نواحی آنتیژنیک ژن CagA و بیان آن در میزبان بیانی میباشد. مواد و روشها: برای رسیدن به این هدف بر اساس برنامههای بیوانفورماتیکی ناحیهای از ژن CagA که دارای بالاترین خاصیت آنتیژنیک بود شناسایی شده و بر اساس آن قطعهای به طول ۹۹۶ جفت باز با استفاده از روش PCR تکثیر شد. این قطعه با استفاده از هضم آنزیمی در ناقل pET۳۲a کلون و سپس به داخل باکتری E.coli سویه BL۲I(DE۳) ترنسفورم و بیان گردید. نتایج: نتایج توالی یابی کلونینگ موفق ژن CagA را در حامل بیانی نشان داد. وزن مولکولی پروتئین نوترکیب تولید شده بر روی ژل SDS-PAGE ، ۵۷ کیلو دالتون بر آورد شد و صحت بیان پروتئین تایید گردید. نتیجه گیری: بر اساس نتایج این مطالعه کلونینگ ناحیه اپی توپی مورد نظر با موفقیت انجام شده و احتمالا میتوان پروتئین نو ترکیب به دست آمده را به عنوان کاندیدای مناسبی برای تولید IgY حاصل از مرغهای ایمن شده برای کنترل عفونت هلیکوباکتر پیلوری در انسان، طراحی کیتهای تشخیصی و تولید واکسن هلیکوباکترپیلوری معرفی نمود .

Keywords:

Helicobacter pylori , CagA , Recombinant protein , هلیکوباکتر پیلوری , ناحیه آنتی ژنیک , CagA , پروتئین نوترکیب