The detection of Klebsiella pneumoniae ۱۶srRNA specific gene by PCR-ELISA technique

زمینه و هدف: کلبسیلا پنومونیه از اعضای خانواده ی انتروباکتریاسه یکی از مهم ترین عامل های عفونت های بیمارستانی می باشد که بعد از Escherichia coli دومین عامل باکتریمی بیمارستانی ناشی از باکتری های گرم منفی است. در این تحقیق هدف شناسایی این باکتری از طریق ژن اختصاصی ۱۶SrDNA با به کارگیری تکنیک PCR-ELISA می باشد. مواد و روش ها: در این روش با استفاده از dNTP نشان دار شده با دیگوکسی ژنین برای تکثیر ژن اختصاصی استفاده شد. کف پلیت الایزا استرپتوآویدین بارگذاری کرده سپس با استفاده از پروب اختصاصی که قسمت ابتدای آن بیوتینه شده بود جهت اتصال به ژن تکثیر شده استفاده گردید. بیوتین متصل به پروب به استرپتوآویدین متصل شده، همچنین ژن تکثیر یافته نیز به پروب اختصاصی متصل  شده در نهایت از آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین برای شناسایی محصول استفاده شد و واکنش با دستگاه نور سنج اندازه گیری شد. نتایج: با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن ۱۶SrDNA کلبسیلا پنومونیه تکثیر شد که نتیجه آن یک قطعه به طول bp ۲۶۰ بود. نتایج حاصل از PCR-ELISA نشان داد که این تکنیک هیچ واکنش متقاطعی با با کتری های هم خانواده خود ندارد، همچنین میزان حساسیت آن ۶/۰ نانوگرم ارزیابی شد. نتیجه گیری: تکنیک PCR-ELISA روشی حساس و دقیق بوده که برای شناسایی عوامل بیماری زا با استفاده از ژن اختصاصی آن باکتری به کار می رود. این تکنیک می تواند جایگزین مناسبی برای تکنیک های زمان بر، با حساسیت کمتر و هزینه بیشتر، همچون روش های کشت باکتری در محیط های بلاد آگار و مک کانکی آگار، Realtime PCR ، تست های بیوشیمیایی افتراقی که امروزه در آزمایشگاه ها مورد استفاده قرار می گیرد، باشد.

Keywords:

Enterobacteriaceae , Klebsiella pneumoniae , ۱۶SrDNA , PCR-ELISA , انتروباکتریاسه , کلبسیلا پنومونیه , ۱۶SrDNA , PCR-ELISA