جداسازی، همسانه سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی
Publish Year: 1395
Type: Journal paper
Language: Persian
View: 144
This Paper With 12 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- I'm the author of the paper
Export:
Document National Code:
JR_BLOOD-14-1_007
Index date: 19 November 2023
جداسازی، همسانه سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی abstract
چکیده
سابقه و هدف
فاکتور سلول بنیادی(SCF)، یک گلیکوپروتئین ۲۸ تا ۴۰ کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلولهای بنیادی خونساز(HSCs) بازی میکند. هدف این مطالعه جداسازی، کلونینگ و بیان SCF در میزبان بیانیRosetta بود. Rosetta علاوه بر ویژگیهای میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می رفت با فراهم کردن کدونهای نادر پروتئینهای یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد.
مواد و روش ها
مطالعه انجام از نوع تجربی بود. RNA تام از سلول های Hela استخراج و به دنبال آن cDNA ساخته شد. توالی رمزکننده SCF ، به وسیله آغازگرهای اختصاصی جداسازی و تکثیر شد و با استفاده از وکتور بیانی pET-۳۲a در E.coli TOP ۱۰ همسانه سازی شد. سازه نوترکیب به وسیله PCR ، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. وکتور نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta تراریخت شد. بیان SCF نوترکیب در حضور IPTG القا شد. بیان فاکتور سلول بنیادی انسانی(hSCF) با SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی و تایید شد.
یافته ها
توالی رمزکننده SCF با موفقیت از سلول های Hela جداسازی و در وکتور بیانی pET-۳۲a همسانه سازی و بیان پروتئین نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta انجام شد.
نتیجه گیری
در سیستم بیانی Rosetta ، امکان تولید پروتئین های یوکاریوتی با کدون های نادر مثل AGG ، AGA ، AUA ، CUA ، CCC و GGA وجود دارد بنابراین به میزان بالایی پروتئین فاکتور سلول بنیادی تولید می شود.
جداسازی، همسانه سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی Keywords:
جداسازی، همسانه سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی authors
مهسا نایب هاشمی
High institute for research and Education in Transfusion Medicine
مهشید محمدی پور
High institute for research and Education in Transfusion Medicine
حسین فهیمی
Pharmaceutical Sciences Branch of Islamic Azad University (IAUPS)
مهریار حبیبی رودکنار
High institute for research and Education in Transfusion Medicine
محمدعلی جلیلی
High institute for research and Education in Transfusion Medicine
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :