جداسازی سلول های بنیادی مزانشیمی CD۳۴+ از مغز استخوان موش

چکید ه   سابقه و هدف   جداسازی و تخلیص سلول های بنیادی مزانشیمی( MSCs ) موش از طریق روش چسبیدن به ظرف کشت پلاستیک، به علت رشد ناخواسته سلول های خونی و غیر مزانشیمی بسیار مشکل است. در این مطالعه، جمعیت هموژن از سلول های بنیادی مزانشیمی CD۳۴+ با روش انتخاب ایمنی مثبت( Positive immunoselection ) از مغز استخوان موش جداسازی شده است.   مواد وروش ها   مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. پس از نخاعی کردن موش های نژاد C۵۷B۱/۶ ، سلول های مغز استخوان آن ها آسپیره و با دانه های آهن ربایی متصل به آنتی بادی ضد CD۳۴ انکوبه گردید. بعد از انتخاب ایمنی مثبت، بخشی از سلول ها برای بررسی درصد بیان مارکر CD۳۴ با دستگاه فلوسایتومتری مورد بررسی قرار گرفتند و مابقی کشت گردیدند. ۲۴ ساعت پس از کشت، سلول های غیر چسبان که عمدتا سلول های بنیادی خون ساز بودند، از طریق شستشو حذف شدند و سلول های چسبیده به ظرف کشت پلاستیک از نظر وجود مارکرهای سطحی( CD۱۱b and CD۴۵ ، CD۳۴ ، Vcam-۱ ، Sca-۱ ، CD۴۴ ) مورد بررسی قرار گرفتند. به منظور اثبات ماهیت مزانشیمی، از آزمایش تمایز به استخوان و چربی استفاده شد.   یافته ها   یک هفته پس از کشت اولیه، جمعیت خالصی از سلول های CD۳۴+ شبه فیبروبلاست به دست آمد. در این سلول ها مارکرهای CD۳۴ ، Sca-۱ ، CD۴۴ و Vcam-۱ بیان شد اما CD۱۱b و CD۴۵ بیان نشد. در این سلول ها ژن های تمایز به استخوان(استئوکالسین، استئوپنتین و گیرنده هورمون پاراتیروئید) و چربی(لیپوپروتئین لیپاز و آدیپسین) بیان شدند.   نتیجه گیری   از این مطالعه می توان نتیجه گرفت که با استفاده از این روش امکان تخلیص سلول های بنیادی مزانشیمی با کارایی بالا از مغز استخوان موش نژاد C۵۷B۱/۶ وجود دارد. سلول های CD۳۴+ مغز استخوان موش C۵۷/B۱۶ با توانایی چسبیدن به ظرف کشت پلاستیک و تمایز به دودمان های اسکلتی، سلول های بنیادی مزانشیمی می باشند.   کلمات کلیدی : سلول های بنیادی مزانشیمی، مغز استخوان، آنتی ژن CD۳۴

Keywords:

Mesenchymal stem cells , Bone marrow , CD۳۴ antigen , سلول های بنیادی مزانشیمی , مغز استخوان , آنتی ژن CD۳۴