توسعه روش NASBA-ELISA برای تشخیص HIV-۱ RNA

چکید ه   سابقه و هدف   با شروع عفونت HIV-۱ ، اولین مارکری که در خون آشکار می شود، RNA ویروسی می باشد. از میان روش های موجود که شناسایی RNA را هدف قرار می دهند؛ متداول ترین روش ها NASBA و RT-PCR هستند. NASBA مزیت های متعددی نسبت به RT-PCR ارایه می کند. در این پژوهش، واکنش NASBA در ترکیب با روش آشکارسازی آسان و حساس الایزا، برای تشخیص و آشکارسازی HIV-۱ RNA مورد استفاده قرار گرفت.   مواد و روش ها   نوع مطالعه انجام شده از نوع بنیادی کاربردی بود. با وارد کردن نوکلئوتید ۱۱-dig-UTP در مخلوط واکنش NASBA ، RNA نشاندار تولید شد. آن گاه محصولات نشاندار NASBA در فاز مایع به یک پروب اختصاصی متصل به بیوتین هیبرید شدند. سپس هیبریدهای حاصل به یک پلیت پوشیده شده با استرپتواویدین منتقل شده، پس از اعمال شستشوها و خارج کردن محصولات غیر اختصاصی از محیط واکنش، آشکارسازی نهایی با اضافه کردن کونژوگه آنتی دیگوکسی ژنین آنزیم و سوبسترای آن صورت گرفت.   یافته ها   نتایج به دست آمده نشانگر کارآیی واکنش NASBA در تکثیر ناحیه مورد نظر از ژنوم ویروس بود و آشکارسازی محصولات NASBA بر روی ژل آگاروز منحصرا یک باند ۱۷۶ نوکلئوتیدی مربوط به هدف را نشان می داد. با به کارگیری روش الایزا در آشکارسازی محصولات NASBA ، برای غلظت ۰۱/۰ مایکرو مولار پروب، OD برابر با ۱۱/۰ ± ۰۴۹/۱ به دست آمد.   نتیجه گیری   در این مطالعه با به کارگیری آغازگر و پروب مناسب، روش تشخیصی NASBA-ELISA با حساسیت و اختصاصیت بالا برای HIV-۱ راه اندازی شد.

Keywords:

Nasba , Elisa , Immunoassay , HIV-۱ , NASBA , الایزا , ایمونواسی , HIV-۱