کلونینگ و بیان موقت ژن محافظت کننده سلولی، HO-۱ ، در سلول های بنیادی مزانشیمال از طریق سیستم بیانی آدنوویروس بر مبنای تکنولوژی Gateway

چکید ه   سابقه و هدف   HO-۱ (هم اکسیژناز-۱) یکی از عوامل قدرتمند محافظت کننده سلولی می باشد. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بیان موقت ژن HO-۱ انسانی در سلول های بنیادی مزانشیمال( MSC ها) با استفاده از سیستم بیانی آدنوویروسی برمبنای تکنولوژی Gateway بود.   مواد و روش ها   در یک مطالعه تجربی، به منظور القای HO-۱ ، رده سلولی ۵۴۹ A به مدت ۱ ساعت با اشعه UV مواجه گردید. cDNA توتال HO-۱ جداسازی شد و از طریق واکنش کلونینگ TOPO به وکتور pENTR TOPO/D کلون گردید. برای ایجاد کلون بیانی، واکنش نوترکیبی LR بین کلون اولیه و وکتور مقصد( pAd/CMV/V۵-DEST ) به انجام رسید. ویروس نوترکیب در رده سلولی یوکاریوتی مناسب تشکیل شد. MSC ها به وسیله ویروس نوترکیب بیان کننده HO-۱ آلوده سازی شدند.   یافته ها   نتایج نشان داد که HO-۱ انسانی نوترکیب با موفقیت کلون شده و صحت و قرار گرفتن ژن در قالب صحیح درون وکتور به وسیله تعیین توالی DNA تایید شد. بیان HO-۱ در MSC ها به وسیله آنالیز RT-PCR و وسترن بلات تایید گردید. این نتایج حاکی از این بود که بیان HO-۱ موقت است.   نتیجه گیری   بیان موقت ژن HO-۱ انسانی در MSC ها با استفاده از سیستم بیانی آدنوویروسی، ممکن است یک استراتژی انتقال ژنی کارآمد در راستای ارتقای سلول درمانی فراهم نماید.

Keywords:

Key words: Mesenchymal Stem Cells , Heme Oxygenase-۱ , Genetic Engineering , Adenoviruses , کلمات کلیدی : سلول های بنیادی مزانشیمال , هم اکسیژناز-۱ , مهندسی ژنتیک , آدنوویروس ها