تعیین هویت مولکولی آسپرژیلوس پارازیتیکوس و فلاووس در نمونه های علوفه با روش Duplex PCR و مقایسه با روش های کشت و مستقیم

آسپرژیلوزیس بیماری عفونی انسان و طیور است که موجب مشکلات عدیده در آنها می شود. هدف اصلی این مطالعه، ارزشیابی دو روش آزمایشگاهی (سنتی و مولکولی) در تشخیص آسپرژیلوس فلاوس و پارازیتیکوس و مقایسه این دو روش می­باشد. بعد از استخراج DNAهای سوش هایاستاندارد آسپرژیلوس پارازیتیکوس و فلاووس به همراه پرایمرهای هر قارچ و تست PCR، ژن های هر قارچ تکثیر و محصول  PCRبه روش TA cloning با استفاده از پلاسمید PTZ۵۷R کلون گردید پس از بهینه سازی تست های PCR و  PCR Duplex ۵۰ نمونه به روش  PCR Duplex، کشت و آزمایش مستقیم آزمایش شدند. در تست اپتیمایز شده PCR، محصول bp ۳۴۳ و bp ۴۱۳آسپرژیلوس پارازیتیکوس و فلاووس به ترتیب تکثیر گردید. ۵۰ نمونه علوفه به روش Duplex PCR  ، کشت و آزمایش مستقیم آزمایش شدند. در آزمایش Duplex PCR ، کشت و آزمایش مستقیم   بر روی نمونه ها، ۱۳ نمونه  با Duplex PCR و ۱۵ نمونه با آزمایش مستقیم و کشت مثبت شد و ۲۶ نمونه با هر دوروش منفی بودند.نتایج بدست آمده از آزمایشات فوق توسط آزمون  MacNemar بین نتیجه مستقیم و کشت از یک سو و نتیجه Duplex PCR  از سوی دیگر انجام شده توافق بین دو تست می باشد P=۰.۸۲۴. طبق نتایج بدست آمده از نظر تشخیص، تفاوت معنی داری بین دوروش آزمایشگاهی وجود نداشت هرچند روش Duplex PCR پاسخ دهی سریعتری نسبت به روش های سنتی داشت و قادر به تشخیص آسپرژیلوسپارازیتیکوس در نمونه ها شد.

Keywords:

آسپرژیلوس فلاووس , آسپرژیلوس پارازیتیکوس , Duplex PCR , علوفه