طراحی و ساخت آدنوویروس های نوترکیب انکولیتیک به منظوردرمان رده های سلولی سرطان معده: رویکرد مبتنی بر وایرال وکتور

سابقه و هدف: ویروس درمانی انکولیتیک به عنوان راهکاری نویدبخش برای درمان سرطان شناخته می­شود. ویروس­های انکولیتیک مانند آدنوویروس ها قادرند در سلول­های سرطانی تکثیر و آن ها را متلاشی کنند. آدنوویروس سروتیپ ۵ ازطریق گیرنده کوکساکی­- آدنوویروس به سطح سلول­های میزبان متصل می­شود. میزان بیان این گیرنده در سطح سلول­های سرطانی بسیار متغییر است. هدف از این مطالعه، ساخت آدنوویروس انکولیتیک با ویژگی انتخابی بالا برای سلول­های آدنوکارسینومای معده(AGS) بوده که قادرند در این سلول­ها تکثیر و آن­ها را تخریب کنند.   مواد و روش ها: در مطالعه تجربی حاضر، توالی اکتروتات در ناحیهHI-loop  فیبرآدنوویروس کلون گردید و بدین ترتیب وکتورهای نوترکیب  pAd۵TATE(wt)و pAd۵TATE(ΔE۱,ΔE۳) ساخته شدند. وکتور pAdZ-TATE(wt) با استفاده از سیستم کلونینگ pADZ سنتز شد. ذرات ویروسی نوترکیب Ad۵TATE(wt) و Ad۵TATE(ΔE۱,ΔE۳) سنتز شد و در سلول های HEK۲۹۳ تکثیر شد. با استفاده از روش کلسیم فسفات، وکتورهای نوترکیب به رده سلولیHEK۲۹۳  منتقل و بدین ترتیب ذرات ویروسی جدید تولید شد. رده سلولی AGS با ویروس­ Ad۵(wt) و Ad۵TATE(wt) آلوده شدند و در زمان­های مختلف، بروز اثرات تخریب سلولی در این سلول­ها بررسی شد. با استفاده از آزمونMTT، میزان بقای سلولی در رده سلولی AGS تیمار شده با ویروس نوترکیب بررسی گردید. یافته ها: اثرات تخریب سلولی(CPE) در کمتر از ۱۸ ساعت شروع و ۷۲ ساعت بعد از آلودگی کامل گردید. تیتر ویروس­­های نوترکیب با روش TCID۵۰ برابر۱۰۷ (برای Lµ  ۱۰۰ از محلول ویروسی) محاسبه شد. همچنین تیتر ویروس­ Ad۵TATE(ΔE۱,ΔE۳) با روش TCID۵۰ برابر TCID۵۰/ml ۱۰۷ بود. نتایج نشان­داد، Ad۵TATE(wt) در مقایسه باAd۵(wt) ، توانایی آلوده سازی سلول­های رده AGS را دارد. نتایج حاصل از آزمون MTT نشان داد، با افزایش غلظت ذرات ویروسی و زمان نگهداری، تعداد سلول­های زنده AGS به طور قابل ملاحظه ای کاهش یافت. نتیجه گیری: یافته­های این پژوهش نشان داد، ویروس نوترکیبAd۵TATE(wt) قادر است به صورت اختصاصی سلول­های سرطانی رده سلولی آدنوکارسینوما معده (AGS) را آلوده و پس از تکثیر، آن ها را متلاشی کند. لذا می­توان از ویروس Ad۵TATE(wt) به عنوان عامل انکولیتیک علیه سلول­های سرطانی رده سلولی آدنوکارسینوما معده(AGS) استفاده کرد.

Keywords:

adenovirus , oncolytic octreotate , gastric adenocarcinoma virus , cell line , Iau Science. , آدنوویروس , ویروس انکولیتیک , اکتروتات , رده سلولی آدنوکارسینوما معده , Iau Science.