ساخت وکتور دوسیسترونی مبتنی بر دومین فیوژن IntF۲A برای بیان همزمان زنجیره های پلی پپتیدی آنتی بادی بواسیزوماب و بررسی تظاهر موقت آن در گیاه توتون
Publish place: Journal of agricultural biotechnology، Vol: 16، Issue: 1
Publish Year: 1403
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: Persian
View: 43
This Paper With 24 Page And PDF Format Ready To Download
- Certificate
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_JOAGK-16-1_003
تاریخ نمایه سازی: 29 بهمن 1402
Abstract:
هدف: بواسیزوماب (با نام تجاری آوستین) یک آنتی بادی مونوکلونال (mAb) انسانی شده است که به طور گسترده ای در درمان سرطان های مختلفی کاربرد دارد. این دارو جزء گرانقیمت ترین و پرفروش ترین داروهای دنیا است. بواسیزوماب از طریق تکنولوژی DNA نوترکیب در سیستم بیان پستانداری، تخمدان همستر چینی تولید می شود. در سال های اخیر، سیستم های بیان گیاهی به دلیل مزایای مختلف برای تولید پروتئین های نوترکیب دارویی، توجه جهانی را به خود جلب کرده اند. تولید موفقیت آمیز mAbها به تاشدگی و گردایش مناسب زنجیره سبک (HC) و زنجیره سنگین (LC) بستگی دارد. بیان همزمان کارآمد و کنترل شده این زنجیره های پپتیدی یک ملاحظه مهم در طراحی وکتورهای بیان آنتی بادی است. هدف این تحقیق ساخت وکتور دو سیسترونی برای بیان همزمان زنجیره های پپتیدی HC و LC آنتی بادی بواسیزوماب با استفاده از دومین فیوژنIntF۲A و ارزیابی آن از طریق بیان موقت در گیاه توتون است.مواد و روش ها: به منظور ساخت وکتور نوترکیب، توالی ژن های رمزکننده بواسیزوماب و IntF۲A از نظر کدونی بهینه سازی شد و برای بیان در گیاه توتون به طور مصنوعی سنتز شدند. وکتور نوترکیب دوسیسترونی بواسطه IntF۲A با روش معمول هضم آنزیمی-اتصال ساخته شد. در نهایت، سازه نوترکیب برای بیان گذرا بواسیزوماب در گیاهان توتون از طریق روش آگروفیلتراسیون استفاده گردید. برای تعیین حضور رونوشت تراژن ها از آنالیز RT-PCR استفاده شد. تولید و میزان تجمع آنتی بادی نوترکیب از طریق آنالیز وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج: ساختار مولکولی وکتور نوترکیب ساخته شده از طریق آنالیز های PCR، هضم آنزیمی و توالی یابی تایید شد. آنالیز RT-PCR نشان داد تراژن ها به صورت یک رونوشت واحد بیان می شوند. آنالیز وسترن بلات تولید آنتی بادی هتروتترامر کامل در برگ های آگرواینفیلتر شده را تایید نمود. سطح تجمع آنتی بادی به طور متوسط ۲۰/۶۷ میلی گرم بواسیزوماب به ازای هر کیلوگرم وزن تر (معادل ۳۶/۳ درصد پروتئین محلول کل) برآورد شد. نتیجه گیری: نتایج نشان داد وکتور دو سیسترونی مبتنی بر IntF۲A بیان همزمان کارآمد ژن های رمزکننده زنجیره های پپتیدی آنتی بادی و تجمع بالای mAb با فرم کامل را در سلول های گیاهی فراهم می کند. از وکتور ساخته شده می توان برای امکان توسعه و ساخت آنتی بادی بواسیزوماب در سیستم بیان گیاهی استفاده کرد.
Keywords:
Authors
پری انداز
دانشجوی دکتری، گروه مهندسی تولید و ژنتیک گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران
مراد جعفری
دانشیار، گروه مهندسی تولید و ژنتیک گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران
مراجع و منابع این Paper:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این Paper را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود Paper لینک شده اند :