بهینه سازی آزمون کامت قلیایی برای مطالعه DNA سلول های منفرد کبدی در ماهی سفید دریای خزر (Rutilus frisii kutum)

الکتروفورز سلول­های منفرد روشی است که برای سنجش آسیب DNA استفاده می شود. این روش به علت سهولت و سرعت بالا نسبت به روش­های دیگر مورد توجه قرار گرفته است. در مطالعه حاضر با اعمال برخی از تغییرات، روش مرسوم سنجش کامت قلیایی با استفاده از سلول­های منفرد کبد ماهی سفید دریای خزر(Rutilus frisii kutum) بهینه سازی شد. برای این منظور ۱۰ عدد ماهی انگشت قد با وزن متوسط ۱±۷ گرم و میانگین طول کل ۲±۱۰ سانتی متر تهیه شد و از بافت کبد آن­ها نمونه برداری شد. نمونه ها تا شروع آزمایش ها در فریزر ۸۰- قرار داده شدند. در بهینه سازی روش مذکور برای دستیابی به سلول­های انفرادی مراحل مختلف سانتریفیوژ حذف شد، مدت زمان انجماد ژل روی اسلاید­ها کاهش و مدت زمان حذف دیواره سلولی با بافر لیز کننده افزایش پیدا کرد و در نهایت روشی ساده برای آرشیو لام­های رنگ آمیزی شده با اتیدیوم بروماید به مدت حداقل دو هفته ارائه شد. نتایج نشان داد علاوه بر کاهش مدت زمان و مواد و وسایل مصرفی، احتمال خطا نیز کاهش یافت. همچنین شاخص­های آزمون کامت مانند طول کامت، ارتفاع کامت، طول دنباله، درصد DNA در دنباله و Tail Moment در مقایسه با روش بهینه سازی شده اختلاف معنی داری را نشان نداد (۰۵/۰P>).

Keywords:

Single-cell Gel Electrophoresis , SCGE , DNA , Caspian kutum , Rutilus frisii kutum