مقایسه دو روش هیستوپاتولوژی و Multiplex-PCR در تشخیص بیماری یرسینیوز (Yersinia ruckeri) در تعدادی از مزارع پرورشی ماهیان قزل آلای کشور

یرسینیا راکری عامل بیماری دهان قرمز روده ای (Enteric red mouth disease) آبزیان است که سالانه موجب خسارات هنگفتی به صنعت آبزی پروری و کشاورزی در ایران و جهان می گردد. تشخیص قطعی، سریع و اقدام موثر برای بیماری هایی مانند یرسینیوز که شیوع شان در مراکز پرورش قزل آلا بسیار سریع است، از اهمیت ویژه ای برخوردار است. هدف از این تحقیق مقایسه دو روش تشخیصی هیستوپاتولوژی و Multiplex- PCR در تشخیص بیماری یرسینوز یا بیماری دهان قرمز روده ای(ERM) در ماهی قزل آلا در ایران است. در این مطالعه در آزمایشات مبتنی بر PCR ، DNA مورد استفاده در هر واکنش PCR از بافت ماهی های قزل آلای مشکوک به بیماری استخراج و محصول واکنشPCR، با استفاده از ژل الکتروفورز روئیت گردید. در پایش پاتولوژی، از بافت ماهی های زنده یا در حال مرگ فیکس شده در محلول فرمالین ۱۰% سالین استفاده شده است. سپس نمونه ها در قالب های پارافین تثبیت و بوسیله میکروتوم های دیجیتال به ضخامت ۷-۵ میلیمتر برش داده شدند. اسلایدهای آماده شده بوسیله هماتوکسیلین ائوزین رنگ آمیزی شده و مورد بررسی قرار گرفتند. در این تحقیق ۲۰ نمونه مشکوک که علائم بالینی مشخص از قبیل سپتی سمی حاد در بافت های داخلی و وخونریزی سطحی در اطراف دهان و مقعد از خود بروز می دادند، با تکنیک های یاد شده مورد ازمایش قرار گرفتند که بر طبق نتایج آزمایشات مولکولی، در نمونه های منفی تنها قطعه مربوط به ژن میزبان به عنوان کنترل واکنش PCR تکثیر شده است، که خود این مسئله صحت انجام آزمایش مولکولی را تایید می نماید، در مقابل در نمونه های مثبت، توالی های ژنی میزبان و همچنین پاتوژن یرسینیا هر دو آمپلی فای و تکثیر شده اند که بیان کننده تشخیص عامل پاتوژن می باشد. از مجموع ۲۰ نمونه مورد آزمایش به روش PCR در مجموع ۲ مورد مثبت و ۱۸ مورد، منفی گزارش شد در مقابل در آزمایشات هیستوپاتولوژی از نمونه های مذکور ۵ مورد مثبت و دارای علایم آسیب شناسی تیپیک و مشخص بیماری یرسینیوز و ۱۵ مورد، منفی و بدون هیچ گونه علایم منتسب به بیماری گزارش شد.

Keywords:

هیستوپاتولوژی